н с энзимом. Молекулярная масса энзима 85 кД, Kw для глутамата около 0,7 мМ, а Км для пиридоксальфосфата 0,05 М. ГДК специфичен для глутамата, слабо взаимодействует с аспарагиновой кислотой. Скорость ГДК-реакции — лимитирующая ступень синтеза ГАМК. Уровень ГАМК в различных областях нервной системы регулируется действием ГДК и при нормальных условиях мало зависит от действия энзимов деградации ГАМК. ГДК является маркером ГАМК-ергических синапсов.

Энзимы катаболизма ГАМК локализованы отдельно от ГДК. ГАМК-трансаминаза (ГАМК-Т, КФ 2.6.1.19) находится в сером веществе мозга, но встречается также и в других тканях. Она также требует пиридоксальфосфат в качестве кофактора и связана с ним прочно. ГАМК-Т обнаружена в митохондриях, в то время как ГДК и ГАМК локализованы в синаптосомах. Км ГАМК-Т для всех субстратов очень высока.

Конечный энзим шунта — дегидрогеназа янтарного полуальдегида — превращает янтарный полуальдегид в янтарную кислоту. Он распространен в ЦНС там же, где и ГАМК-Т. Это митохондриальный энзим, который специфичен для янтарного полуальдегида и НАД"1", активируется сульфгадрнлъными реагентами и подавляется субстратом при концентрации последнего выше 10~4М.

ГАМК является наиболее широко распространенным медиатором торможения в нервной системе. У млекопитающих она локализована в нервных окончаниях тормозных нейронов ЦНС. ГАМК тормозит биоэлектрическую активность не только головного мозга позвоночных, но и нервных цепочек и ганглиев беспозвоночных животных. Соответственно ГАМК и ферменты ее обмена также локализованы в нервных структурах беспозвоночных, совпадающих с расположением тормозных синапсов. Физиологическое действие ГАМК обусловлено взаимодействием со специальными рецепторами и рассматривается далее в гл.7 и 8.

2.3. КОМПАРТМЕНТАЛИЗАЦИЯ МЕТАБОЛИЗМА АМИНОКИСЛОТ

Компартментализация метаболизма является ключевым фактором взаимоотношений между глутаматом, глутамином и ГАМК, Впервые это явление было открыто в лаборатории Вэл-

51

ша в конце 50-х — начале 60-х годов и известно под названием эффекта Вэлша. При определенна условиях в опытах с использованием меченых предшественников специфическая радиоактивность продукта, образованного в короткий промежуток времени, превышает специфическую активность предшественника (выделенного из ткани в тех же условиях) иногда в несколько раз. Эти наблюдения позволяют сделать заключение, что метаболизм имеет место в малом, высокоактивном пуле, а меченый предшественник разбавляется при выделении большим количеством немеченого предшественника из другого, малоактивного пула.

Инъекция меченого глутамата, аммония, бикарбоната, ацетата, бутирата, цитрата и других, как правило, приводила к тому, что специфическая радиоактивность глутамина была выше предшественника, изолированного вскоре после инъекции. Этот эффект не был обнаружен после инъекции меченой глюкозы, пирувата, лактата, глицерина. Данные позволили заключить, что глюкогенные субстраты метаболируют до аминокислот в ком-партментах (пулах, отсеках), отличных от тех, в которых обмениваются кетогенные субстраты.

Эффект Вэлша — специфическое свойство нервной системы и демонстрируется в опытах как in vitro, так и in vivo. В дальнейшем кинетическими исследованиями с различными метаболическими предшественниками было показано наличие в головном мозге различных метаболических компартментов цикла трикар-боновых кислот и аминокислот, связанных с этим циклом. Некоторые исследователи ограничивают число компартментов двумя — большим и малым, другие описывают до шести метаболических компартментов. Очевидным является факт, что каждый компартмент является суммой большого числа микрокомпартмен-тов с более или менее сходными метаболическими свойствами .

"Большой" компартмент включает в себя относительно большие пулы промежуточных соединений, которые быстро обменивается с большим пулом глутамата и малым пулом глутамина. Глюкоза используется во всех компартментах, но в "большой" компартмент включается до 90% гликолитического потока и большая часть общего потока через ЦТК. Глюкогенные предшественники метаболируют преимущественно в этом ком-партменте, и глюкоза может рассматриваться как предпочтительный метаболит большого компартмента. Этот же компартмент содержит основную часть общего глутамата и аспартата. Однако скорость синтеза глутамина в нем относительно низка.

Полагают, что "большой" компартмент расположен главным образом в нейронах и участвует преимущественно в энергети-52

ческих процессах. Предположение о нейрональной локализации "большого" метаболического компартмента подтверждается, например, исследованиями на животных с различным ти-реоидным статусом. Так, удаление щитовидной железы при рождении животного выливается в недоразвитие нейрональных систем. Одновременно наблюдается недоразвитие "большого" метаболического компартмента. Напротив, обработка тиреоид-ными гормонами ускоряет созревание мозга и развитие метаболической компартментации.

"Малый" метаболический компартмент включает в себя ЦТК, но с малыми пулами его компонентов, которые быстро обмениваются с малым пулом глутамата, находящимся, в свою очередь, в равновесии с большим пулом глутамина. "Малый" компартмент является главным источником глутамина. Окислительная способность "малого" компартмента низка; вероятно, он не богат структурами, вовлекаемыми в синтез белка, и митохондриями. Морфологическая характеристика астроглии (малая плотность митохондрий и рибосом) соответствует биохимическим свойствам "малого" метаболического компартмента. Пул глутамата, связанный с синтезом глутамина, составляющий малую долю общего пула глутамата, находится в астроии-тах. Последние составляют лишь около четверти от общего объема ткани мозга, причем концентрация глутамата в них ниже, чем в ткани ЦНС в целом. Коммуникация между "малым" и "большими" компартментами осуществляется через транспорт глутамина и ГАМК, а также путем аксонального тока белков из нейронального перикариона к нервным окончаниям.

Значение метаболических компартментов состоит в пространственном отделении биосинтетических процессов от тех метаболических путей, которые строго контролируются энергетическими нуждами. Это явление характерно именно для нервной ткани, которая отличается большой функциональной гетерогенностью составляющих ее элементов, большой долей крупных и средних клеток с разнообразными системами органелл и, наконец, большой протяженностью отростков нервных клеток, что затрудняет возможность смешивания метаболитов.

Метаболическая компартментализация аминокислот, в частности аминокислот глутаминовой группы, особенно ярко проявляется в субклеточной локализации ферментов в ГАМК-ер-гическом нейроне (рис.2.2) и в астроцитах. Так, пируваткар-боксилаза локализована преимущественно в астроцитах, в то время как пируватдегидрогеназный комплекс более активен в нейронах, чем в астроцитах. Преимущественная локализация

53

пируватдегидрогеназы в нейронах ответственна в конечном счете за низкое включение углерода глюкозы, лактата и глицерина в глутамин. Глутамин-синтетаза преимущественно локализована в астроцитах, а глутаминаза — в нейронах. Глутамат, поглощаясь астроцитами, превращается в глутамин в глутамин-синте-тазной реакции. Глутамин, выйдя из астроцитов и входя в нейроны, образует глутамат и далее ГАМК. Таким образом, глутамин и ГАМК осуществляют коммуникацию между большим и малым метаболическими компартментами.

ГАМК-ергиткое ингибиторное окончание

® \ \

ПИРУВАТ ГАМК ГАМК

ГАМК \±

С

Постсинаптическая мем&рана

Рис. 2.2. Схема ГАМК-ергического ингибиторного нервного

окончания:

1 — глутаматдекарбоксилаза; 2 — трансаминаза ГАМК; 3 — высокоаффинный захват; 4 — трансаминаза ГАМК; 5 — глута-минсинтетаза; 6 — глутаминаза

54

Помимо нейронально-глиального транспорта аминокислот в последние годы установлена возможность перемещения свободных аминокислот от проксимального к дистальному концу нейрона. Так, глутамат, введенный в мозг, передвигается вдоль аксонов двигательных нейронов и оказывается в мышечных нервных окончаниях.

2.4. ГЛИЦИН И ПУТИ ЕГО ОБМЕНА

Глицин участвует не только в биосинтезе белков, но и в других многочисленных биосинтетических процессах, таких, как образование пуринов, порфиринов, креатина, этаноламина, холина, глутатиона и др. Глицин функционирует также в качестве ингибиторного трансмиттера главным образом в спинном мозге.

Так как потребление глицина в нервной ткани относительно велико, а поступление его из крови происходит медленно, значительная часть глицина синтезируется в мозге de novo. Глюкоза и серии являются главными источниками глицина в ЦНС. Серии может образовываться из глюкозы через 3-фосфоглице-риновую кислоту (схема 2.6). Кроме того, серии сравнительно быстро поступает из циркулирующей крови.

Синтез глицина de novo происходит в нервной ткани из се-рина путем обратимой N5, -метилентетрагидрофолат-тет-рагидрофолатзависимой трансформации при участии фермента серингвдроксиметилтрансферазы (КФ 2.1.2.1).

Реакция катализируется серингидроксиметилтрансферазой и протекает следующим образом:

но-снг-нс-соон

I + тетрагидрофолат <

NH2

серии

«-> СН2-СООН

I + ^1Ч10-метилентетрагидрофолат

NH2

глицин

55

Схема 2.6. Пути метаболизма глицина в ЦНС (1 — серингидроксиметилтрансфераза; 2 — глицинаминотранс-фераза)

глюкоза I

| гликолиз -3-Ф-глицериновая кислота

3-Ф-гидрокси-пируват

глутамат ч

р-квтоглу->^ тарат

e-3-Ф-серин

глицерат

I

гидрокси-пируват

2-Ф-глицериновая кислота I \

\

Z.—калении ерин / V—^.пируват

пируват

СЕРИИ

N5, М10-метилен ФН'

©

ГЛИЦИН

<**кетоглутзрат

глутамат

У Г

белки у

ЦТК

^глиоксилат

глутатион

гуанидин-уксусная кислота

креатин

Этот фермент относится к пиридоксальзависимым\ при оптимальной активности в нем содержится 6 молекул пиридоксаль-фосфата. Активность фермента в метаболических пулах головного мозга относительно постоянна, высокая активность его

56

обнаружена в спинном мозге и в мозжечке. Активность в сером веществе спинного мозга больше, чем в бело