Биологический каталог




Руководство к практическим занятиям по микробиологии

Автор М.Н.Пименова, Н.Н.Гречушкина, Л.Г.Азова, А.И.Нетрусов и др.

— 1,0; MgS04-7H20 — 0,5; вода водопроводная — 1000 мл.

3. Среда Чапека—Дакса состава (г): сахароза —30,0; —3,0; КгНР04 —1,0; MgS04-7H20 — 0,5; KCl — 0,5; FeS04-7H20 - 0,01; агар - 15,0; вода дистиллированная — 1000 мл.

4. Среда Ван-Итерсоиа для грибов, использующих целлюлозу. Двойной кружок фильтровальной бумаги сворачивают в виде фильтра и ставят острием вверх з колбу Эрленмейера на 100 мл с 50 мл водопроводной воды, содержащей 0,75 г/л КН2Р04 и 0,1 г/л MgS04. Стерилизуют при 1,0 ати; рН до стерилизации устанавливают 7,0—7,4.

Среда Сегала для выделения галофнлов

Жидкая среда (г/л): казаминовые кислоты — 7,5; дрожжевой автолизат — 10,0; 3-замещенный цитрат натрия — 3,0; КО — 2,0; MgS04-7H20 — 20,0; FeCl3 — 0,023; NaCI — 250,0; вода дистиллированная — 1000 мл. Компоненты среды последовательно растворяют в 800 мл воды, доводят рН до 7,5—7,8 с помощью 1 М КОН, затем смесь автоклавируют при 1 ати 5 мин, среду охлаждают и фильтруют от осадка. Доводят рН до 7,4 с помощью 1 М НС1, а объем до 1000 мл и стерилизуют автоклавироааиием при 0,5 аги.

Если необходима твердая среда, то к жидкой среде после первого автокла-вирования и доведения рН добавляют 20 г/л агара, нагревают до его расплавления, а затем автоклавируют. Среду разливают в чашки Петри при 60—70°, чтобы предотвратить преждевременное затвердение.

Среды для генетических экспериментов с Е. coll

Минимальная среда А (г/л); KsHPO^l.O.S; КН2Р04 — 4,5; Богатая среда LB (г/л): трилтон — 10,0; дрожжевой экстракт — 5,0; NaCI — 5,0.

Эритрозин карболовый

Эритрозии — Зг; вода дистиллированная — 100 мл; феиол свежеперегиан-ный — 5 г. После растворения эритрозина и фенола смеси дают отстояться.

Сафранин, водный раствор

2,5%-иый раствор сафранина в 96°-иом этаноле — 10 мл; вода дистиллированная — 100 мл.

Реактивы для окраски жгутиков

Протрава. 12 г таннина растворяют при нагревании в 48 мл дистиллированной воды, к раствору прибавляют 30 мл насыщенного водного раствора железного купороса (FeSC>4) и 6 мл насыщенного спиртового раствора фуксина. Раствор отфильтровывают и сохраняют в банке с притертой пробкой. Протрава бывает готовой к употреблению через несколько дней после приготовления и может храниться в течение нескольких месяцев.

Краситель. Карболовый фуксин Циля и вода дистиллированная в соотношении 1:1.

Протраву и карболовый фуксии Циля готовят заранее. Разбавленный фуксии следует готовить незадолго до употребления. Непосредственно перед работой протраву и разбавленный фуксии необходимо отфильтровать через складчатый бумажный фильтр, так как осадки красок, легко образующиеся на стеике при наличии даже небольших количеств белка, будут сильно мешать окрашиванию в рассмотрению объекта.

Реактивы для окраски жгутиков по методу Фонтана

Протрава: таииин — 5 г; фенол кристаллический — 1 г; вода дистиллированная — 100 мл.

Реактивы для серебрения: серебро азотнокислое — 5 г; вода дистиллированная — 100 мл.

Раствор серебра следует готовить без фильтрования и хранить в темной склянке. К 3—4 мл 5%-иого раствора азотнокислого серебра по каплям прибавляют раствор аммиака до помутнения и образования осадка, а затем осторожно — до растворения осадка. После этого вновь прибавляют раствор серебра до появления легкой опалесцеиции. Полученный раствор аммиачного серебра разводят дистиллированной водой в Г0 раз.

Анилиновый черный

Анилиновый черный — 1,5 г; этанол 96°-иый — 50 мл; уксусная кислота 80%-иая — 10 мл; вода дистиллированная .— 40 мл. После растворения краску фильтруют и через 3 дня она готово к употреблению.

Красители для выявления липидов

1. Судан III — 0,5 г; молочная кислота концентрированная — 100 мл.

2. Судан черный В — 0,3 г; этиловый спирт 70°-ный горячий — 100 мл .

Раствор выдерживают в течение иеокольких часов при 60° в закупоренной

скляике, затем охлаждают и фильтруют.

Малахитовый зеленый, водный раствор Малахитовый зеленый — 7,5 г; вода дистиллированная — 100 мл.

Раствор Люголя в модификации Грама

Йод кристаллический — 1 г; калий йодистый — 2 г; вода дистиллированная — 300 мл.

В ступку емкостью 30—50 мл помещают навеску йода и йодистового калия» растирают смесь пестиком, добавляют 1 мл дистиллированной воды и, продолжая растирать кристаллы, добавляют еще 5 мл воды- Йод растворяется в йодистом калии. Раствор количественно переносят в склянку и доводят общий объем До 300 мл. Срок годности раствора не более 30 дней;хранят его в темной посуде,

Раствор Люголя для выявления гликогена и гранулезы

Йод кристаллический — 1 г; калий йодистый — 3 г; вода дистиллированная — 300 мл. Раствор готовят так же, как предыдущий.

Приготовление тушн для негативного контрастирования Тушь черная — 10мл; вода дистиллированная — 30 мл.

Разведенную тушь центрифугируют, надосадочный слой разливают в пробирки и стерилизуют при 0,5 ати. Сохранить тушь можно также добавляя к ней раствор тимерсола (1:1 000) в соотношении 1:2 и твин-80 (1:100) — 1 капля на 100 мл раствора.

Бумага, пропитанная раствором уксуснокислого свинца

Нарезают полоски фильтровальной бумаги, погружают их на 5—10 мин в 5%-иый водный раствор уксуснокислого свинца, высушивают на воздухе и стерилизуют в чашке Петри автоклавированием при 0,5 ати.

Реактив Фолина для определения белка по Лоури

В колбу объемом 1500 мл вносят 700 мл дистиллированной воды, 100 г воль-фрамовокислого натрия (Na2W04-2H?0). 25 г молибденовокислого натрия Реактив Эрлиха

Яара-диметиламинобензальдегид — I г; 96°-ный этанол — 95 мл. НО концентрированная — 20 мл.

Реактив Эрлнха в модификации Ковача

Яара-диметиламинобензальдегид — I г; амиловый или изоамиловый спирт — 15 мл; НО концентрированная — 10 мл.

Реактив Несслера KI— 70 г; Hgl2—100 г; КОН - 100 г.

Раствор 1. Навески KI н Hgl2 растворяют в 400 мл дистиллированной воды. Раствор 2. Навеску КОН растворяют в 500 мл дистиллированной воды. Растворы 1 и 2 смешивают и доводят общий объем до 1 л. В случае образования осадка верхний прозрачный слой декантируют. Раствор хранят в темной стеклянной посуде. В продаже имеется готовый реактив Несслера,

Реактив Грисса

Раствор 1. 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты. Добавляют 100 мл дистиллированной воды и фильтруют. Раствор сульфаниловой кислоты устойчив в течение месяца.

Раствор 2. 0,1 г а-нафтнламина растворяют в 100 мл кипящей дистиллированной воды. Охлаждают и добавляют SO мл ледяной уксусной кислоты. Раствор а-нафтиламина фильтруют н хранят не более недели. Непосредственно перед использованием смешивают равные объемы этих растворов.

Реактивы для крахмало-йодной пробы на ннтрнты

1. Крахмал — 0,4 г; ZnCl2 — 2,0 г; Н20 — 100 мл.

ZnCl2 растворяют в 10 мл воды, кипятят и добавляют крахмал. Доводят объем до 100 мл и оставляют стоять неделю. Затем раствор фильтруют и добавляют равный объем 0,2%-ного раствора KI.

2. Раствор соляной кислоты: концентрированная НС! — 10 мл; вода — 84 мл.

Фиксирующие жидкости

1. 96°-ный этиловый спирт; время фиксации — 10—15 мин.

2. Метиловый спнрт, безводный; время фиксации — 3—5 мин.

3. Смесь Никифорова; этиловый спирт и серный эфир в равных объемах, время фиксации — 5—10 мин.

4. Спнртформол — 40%-ный формалин — 5 мл; 96°-ный этиловый спирт — 95 мл; время фиксации — 5—»15 мин.

5. 1—2%-ный водный раствор осмиевой кислоты; фиксация в парах 3—5 мин. Раствор осмиевой кислоты хранят в темном флаконе с притертой пробкой. При работе соблюдать осторожность, так как пары осмия могут повредить глаза.

6. 40%-ный формалин, фиксация в парах — несколько секунд.

7. Фиксатор Карнуа: 96°-ный спирт — 60 мл„ хлороформ — 30 мл, ледяная уксусная кислоты — 10 мл; время фиксации — 15 мин.

8. Жидкость Руге: 40%-ный формалин — 20 мл, ледяная уксусная кислота — 1 мл, вода дистиллированная — 1000 мл; время фиксации — 5 мии. Рекомендуется для фиксации клеток, выращенных в жидких средах неопределенного состава.

9. Фосфорномолибденовая кислота, 5%-ный водный раствор; время фиксации — 5 мин.

Черинла по стеклу

Раствор 1. 1 г фуксина основного растирают в ступке с 15 мл этилового спирта.

Раствор 2. К 2 г таннина добавляют 15 мл воды н нагревают до кипения. Растворы 1 н 2 смешивают в равных объемах.

Перегонка фенола

Фенол перегоняют из колбы Вюрца, закрытой корковой пробкой. Колбу помещают непосредственно на сетку. В качестве приемника используют заранее взвешенную сухую фарфоровую чашку. В нее отгоняют некоторое количество фенола, н когда он застывает, определяют его массу, исходя из которой готовят соответствующий объем раствора или необходимого реактива. Перегонку фенола осуществляют в вытяжном шкафу. При работе с фенолом следует соблюдать большую осторожность, так как он вызывает сильные ожоги.

Примечание. Вода дистиллированная.

Буферные растворы для приготовления и разведения суспензий микроорганизмов. Схема приготовления буферных растворов

Буферный раствор Компонент А Компонент Б

Фосфатный 0,1 М Ыа2НР04-2НзО 17,8 г/л 0,1 М NaH2PCv2H->0 15,6 г/л

Три

страница 45
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46

Скачать книгу "Руководство к практическим занятиям по микробиологии" (2.03Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(23.09.2019)