Биологический каталог




Руководство к практическим занятиям по микробиологии

Автор М.Н.Пименова, Н.Н.Гречушкина, Л.Г.Азова, А.И.Нетрусов и др.

5—10 фирмы «СИНПОР» и марок VF, VM, VC, SLGS, SLHA, DA фирмы «МИЛЛИПОР».

Плотные диски, изготовленные из смеси асбеста с целлюлозой, называются фильтрами Зейтца. В зависимости от диаметра пор они обозначаются разными индексами: ЕК — поры диаметром 1,5—1,8; EKS — 1,2—1,5; EKS-1 — 1,0—1,2; ЕКП — 0,8—1,0 мкм. В России выпускают асбестовые фильтры марок Ф2 и СФ. Стерилизующими являются СФ-3 и СФ-4,

Асбестовую пластинку помещают в специальный держатель, который обычно изготавливают из нержавеющей стали, и крепко

зажимают винтамл между верхней (цилиндрической) и нижней (воронкообразной) частями держателя. Трубка нижней части держателя через резиновую пробку проходит в колбу Бунзена. Нередко весь этот прибор в собранном виде называют фильтром Зейтца.

Для стерилизации используют также стеклянные пористые фильтры, изготовленные из каолина с приместью кварцевого песка — «свечи» Шамберлана и из инфузорной земли — «свечи» Беркефель-да. Пористость первых обозпор

с металлическим держателем

Рис. 35. ^риилбь°/^в^е^терилизации качается буквой L с цифрами А — со стеклянные держателем; Б— от 1 ДО 13 соответственно

уменьшению диаметра фильтра от 9 до 1,2 мкм. Мелкопористые свечи обозначаются также маркой «В», крупнопористые — «F». Фильтры Беркефельда обозначают буквами V, N, W, что соответствует следующим размерам пор (мкм): 8—12, 5—7, 3—4.

«Свечи» и специальные держатели с закрепленными в них асбестовыми фильтрами герметически соединяют с колбой Бунзена для фильтрации в вакууме (рис. 35). Перед употреблением фильтры, их держатели и приемник фильтрата должны быть просте-рилизованы.

Мембранные фильтры стерилизуют автоклавированием при 1 ати 15 мин или длительным кипячением. Держатель вместе с резиновой пробкой заворачивают в бумагу и автоклавируют при 1 ати 20—30 мин. Фильтры Зейтца автоклавируют в собранном виде. «Свечи» стерилизуют вместе с резиновыми пробками в автоклаве. Колбу Бунзена закрывают ватной пробкой, в отводную трубку вставляют ватный тампон и стерилизуют горячим воздухом.

32. СТЕРИЛИЗАЦИЯ СТЕКЛЯННОЙ ПОСУДЫ

Основным способом стерилизации стеклянной посуды является обработка ее сухим горячим воздухом при температуре не выше 180° в течение 1—3 ч (табл. 5). При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухожаро-вых) стерилизаторах и сушильных шкафах, приспособленных для стерилизации. Они различаются по форме и спо-ообам обогрева, но имеют сходное устройство. Их делают из термостойких материалов — обычно из металла и асбеста. Внутри стерилизатора имеются полки для размещения посуды, а наверху отверстие, в котором с помощью пробки укрепляют термометр. У стенки стерилизатора (шкафа) или вблизи греющей поверхности температура всегда значительно выше, чем внутри, поэтому ртутный шарик термометра должен находиться внутри шкафа на расстоянии 6—8 см от верхней стенки. В верхней части сушильных шкафов имеется также отверстие для вентиляции, которое при стерилизации закрывают. Стерилизаторы и шкафы с электрическим обогревом снабжены терморегулятором, обеспечивающим автоматическое поддержание необходимой температуры.

Подготовка посуды к стерилизации. Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. Посуду развертывают непосредственно перед употреблением. В верхние концы пипеток вставляют ватные тампоны. Торчащие из пипеток волокна ваты сжигают в пламени горелки. Пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4—5 см. Обмотку начинают с оттянутого конца и постепенным движением бумаги по спирали заканчивают у конца с ватным тампоном. Завернутые пипетки для предохранения бумаги от загрязнения и разрывов перед стерилизацией упаковывают по нескольку штук вместе или помещают в специальные металлические или картонные пеналы. Чашки Петри обычно заворачивают в пакеты по 2—4 штуки, шпатели — обязательно по отдельности, но затем, как и пипетки, их объединяют в общий сверток. Колбы, пробирки и трубки Бурри закрывают ватными пробками. На пробки можно надеть бумажные колпачки, предохраняющие горлышко от пыли.

Стерилизация. Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в стерилизатор (или в сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный, надежный прогрев стерилизуемого материала. Стерилизатор (сушильный шкаф) во время работы должен быть плотно закрыт. При отсутствии терморегулятора, необходимо строго следить за температурой, так как при понижении ее не осуществится стерилизация, а при нагреве выше 180° бумага и пробки начинают обугливаться. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80°, так как при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Лучше всего .выгружать посуду только после того, как температура в стерилизаторе сравняется с комнатной.

Посуду можно стерилизовать и в автоклаве. Режим стерилизации в этом случае существенно зависит от объема сосудов и толщины стекла (см. табл. 4). Для автоклавирования посуду готовят, как и для сухожаровой стерилизации. Следует иметь в виду, что в автоклаве посуда увлажняется.

3.3. СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИНСТРУМЕНТОВ И ПРИБОРОВ

Мелкие металлические инструменты: петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели стерилизуют прокаливанием в пламени (т. е. нагреванием докрасна) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно обжигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при пересевах культур и разливе сред. В пламени погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов.

Шприцы лучше всего стерилизовать сухим жаром при 160° либо в собранном, либо в разобранном виде. В первом случае длительность стерилизации 75 мин, во втором — 60 мин. Собранные шприцы вместе с иглой стерилизуют в пробирке, закрытой ватной пробкой, разобранные заворачивают в бумагу или ткань. Можно стерилизовать шприцы и в автоклаве при 1 ати в течение 15—20 мин. Автоклавируют их только в разобранном виде, иначе они повреждаются. Прокаливать шприцы нельзя, так как от этого они портятся.

Термостойкие приборы для культивирования микроорганизмов, а также детали к этим приборам, резиновые пробки и шланги стерилизуют в автоклаве. При этом емкости закрывают в бумагу, режим автоклавирования выбирают в соответствии с термостойкостью материала, из которого сделан прибор.

Некоторые предметы (металлические инструменты, мелкие стеклянные детали, мембранные фильтры) иногда стерилизуют длительным (в течение 30—60 мин) кипячением в дистиллированной воде. Металлические и стеклянные предметы лучше всего кипятить в специальных закрытых сосудах — стерилизаторах. Можно использовать для этой цели и металлическую посуду. Мембранные фильтры обычно кипятят в колбе или химическом стакане, закрытых ватными пробками. Однако этим способом с целью стерилизации в микробиологической практике пользуются редко в связи с тем, что длительное кипячение может повредить обрабатываемый материал, а сокращение времени кипячения может не обеспечить стерильность, так как споры некоторых анаэробных микроорганизмов сохраняют жизнеспособность даже после кипячения в течение нескольких часов. Надежность стерилизации при кипячении может быть увеличена внесением в воду какого-либо бактерицидного средства: 2%-ного формальдегида, 0,1%-ной сулемы или 1%-ной бриллиантовой зелени. Но в этом случае возможно загрязнение биоцидами стерилизуемых предметов.

3.3.1. Стерилизация газообразными веществами

Аппаратуру, имеющую зеркальное, оптическое и радиоэлектронное оборудование, а также изделия из термолабильных пластмасс, например центрифужные пробирки, стерилизуют газовым методом. Для газовой стерилизации применяются только те соединения, которые обладают спороцидными свойствами. Это оксид этилена, метилбромид, оксид пропилена, формальдегид, глю-таральдегид, бета-пропиолактон, озон и др. Особенно эффективна смесь оксида этилена и бромистого метила в массовом соотношении 1:1,44 (смесь «ОБ»).

Газовую стерилизацию проводят в специальных герметически закрывающихся аппаратах. Стерилизуемые объекты, помещаемые в камеру, упаковывают, как при стерилизации в автоклаве или сушильном шкафу. Для упаковки используют материалы, непортящиеся в газовой среде и пропускающие газ и влагу: оберточную бумагу, муслин, хлорвиниловые и нейлоновые пленки. Перед вве* дением в камеру биоцида из нее как можно полнее удаляют воздух, чтобы обеспечить тесный контакт активно действующего вещества со стерилизуемым объектом. При стерилизации строга контролируют концентрацию газа, давление, влажность, температуру и длительность экспозиции. В большинстве случаев процесс проводят в сочетании с некоторым повышением температуры (до 45—70°). Режимы стерилизации разными газами неодинаковы. Они определяются прежде всего свойствами биоцида. Имеет значение и конструкция стерилизационного аппарата. Оптимальный режим стерилизации смесью «ОБ» при 50° в аппарате емкостью 100 л и более следующий: концентрация смеси 3,36 г/л (давление 1,2 ати), относительная влажность 80—100%, продолжительность 24 ч. По окончании стерилизации удаляют газы из камеры с помощью вакуумного насоса и на некоторое время камеру оставляют под вакуумом для десорбции газов из стерилизованных предметов. После этого камеру заполняют стерильным воздухом. Предметами, простерилизованными газами, рекомендуется пользоваться не ранее чем через 24 ч после стерилизации. Это необходимо для полного удаления из них газа. Целесообразно на этот период поместить их в вытяжной шкаф или оставить в хорошо проветриваемом помещении. Некоторые изделия из пластмасс требуют дополнительной аэрации до 9 суток. При проведении газовой стерилизации строго соблюдают правила работы с ядовитыми газообразными веществами.

3.3.2. Стерилизация облучением

Для стерилизации помещений, оборудования, некоторых медицинских принадлежностей, п

страница 7
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46

Скачать книгу "Руководство к практическим занятиям по микробиологии" (2.03Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(06.12.2019)