Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 2

Автор Ф.Герхардт

гару (разд. 13.9.12) добавляют один из следующих растворов антибиотиков, стерилизованных фильтрованием:

Сульфат стрептомицина (Sigma) 100 мкг/мл

Пенициллин G (Sigma или Squibb) 500 мкг/мл

Рифампии (Sigma) 50 мкг/мл

13.9.15. Минимальный бульон или агар Дэвиса

В одну колбу (например, в двухлитровую колбу Эрленмейера) вносят:

К2НР04 7 г MRS04-7H80 0,1 г

КН2Р04 2 г (NH4bS04 1,0 г

Цитрат натрия 0,5 г Дистиллированная вода 500 мл

В отдельную колбу вносят:

Агар (не нужен для приготовления бульона) 15 г

Декстроза 5 г

Дистиллированная вода 500 мл

Оба раствора автоклавируют при 121 °С (105 Па) 15 мин и дают им остыть до температуры около 55 °С. Растворы объединяют, перемешивают и разливают по чашкам Петри размером 100x15 мм.

13.9.16. Бархатные репликаторы

В качестве репликаторов используют обычно квадратные кусочки бархата со стороной 15 см. Их заворачивают пачками по 10—20 шт. в плотную бумагу и автоклавируют в течение 10—15 мин при 121 °С в аппарате, имеющем быстрый выход пара и вакуумное высушивание.

13.9.17. LC-Arap для верхнего слоя

(для локального мутагенеза)

Триптон 10 г Агар 7 г

Дрожжевой экстракт 5 г Дистиллированная

NaCI 5 г вода 1 л

Ингредиенты растворяют, распределяют по бутылям и автоклавируют при 121 °С в течение 20—25 мин.

13.9.18. LC-Arap

(для локального мутагенеза)

Триптон 10 г Агар 10 г

Дрожжевой экстракт 5 г Дистиллированная

NaCI 5 г вода 1 л

Автоклавируют 30 мин при 121 °С. Перед заливкой в чашки на каждый литр смеси добавляют следующие предварительно простерилизованные растворы:

0,5 М СаСЬ 4 мл

20%-ная глюкоза 5 мл 0,25%-ный тимидин 40 мл

13.9.19. Спектиномициновый или стрептомициновый агар

(для локального мутагенеза)

Готовят L-arap (разд. 13.9.2). После автоклавиро-вания в стерильных условиях добавляют спектиномицин (2 мл простерилизованного фильтрованием 5%-ного раствора) или сульфат стрептомицина (1 мл простер илизованного фильтрованием 10%-ного раствора). Тщательно перемешивают и разливают по чашкам.

13.9.20. Агар для верхнего слоя

(для теста Эймса)

NaCl 5 г

Агар 6,5 г

Дистиллированная вода 1 л

Растворяют нагреванием и распределяют порциями по 100 мл в колбы. Автоклавируют 15 мин при 121 °С и охлаждают до температуры около 50 °С. После автокла-вирования на каждые 100 мл агара добавляют 10 мл стерильного исходного раствора, в состав которого входят следующие вещества:

ЬГистидин-НС1 (0,5 мМ) 10,5 мг/100 мл

Биотин (0,5 мМ) 12,2 мг/100 мл

13.10. источники ШТАММОВ

И СПЕЦИАЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ

13.10.1. Штаммы

Штаммы Escherichia coli. Генетический центр, коллекция штаммов кишечной палочки, д-р Барбара Бах-ман. Отделение генетики человека, медицинский факультет Иельского университета, 333 Cedar St., New Haven, CT 06510.

Штаммы Bacillus subtilis. Куратор генетического центра — коллекции штаммов рода Bacillus, отделение микробиологии, Университет шт. Огайо, Колумбус, ОН 43210.

Штаммы Salmonella typhimurium для проверки на канцерогенную/мутагенную активность. Д-р Брюс Н. Эймс, отделение биохимии, Калифорнийский университет, Беркли, Беркли, СА 94720.

13.10.2. Среды, химические агенты и реактивы

Ростовые среды. Агар, среды для определения чувствительности к антибиотикам, питательный бульон, декстроза и пр. Difco Laboratories, Detroit, MI, 48232; BBL Microbiology Systems, Cockeysville, MD 21030.

Фосфаты и другие неорганические соли. Mallinckrodt Chemicals, St. Louis, MO 63147. Общедоступны через компании, занимающиеся лабораторными поставками.

Аминокислоты, 2,3,5-трифенилтетразолийхлорид, 5-бромурацил, 2-аминопурин, гидроксиламин, 5-метил-триптофап, этилметансульфонат, эритромицин, нитрозо-гуанидин, рифампин, пенициллин G, сульфат стрептомицина, дауномицин, глюкозо-6-фосфат, никотинамида-дениндинуклеотидфосфат, сульфаниламид. Sigma Chemical Co., Р. О. Box 14500, St. Louis, MO 63178.

ICR-191 и ICR-170 Polysciences, Inc., Paul Valley Industrial Park, Warrington, PA 18976.

Лактоза. Лактоза CHR (без примеси глюкозы). U. S. Biochemical Corp., Cleveland, ОН 44122.

Метилметансульфонат, этилметансульфонат, нитрит натрия. Eastman Organic Chemicals Rochester, NY 14650.

Стандартные мутагены для испытаний. Бензо(а)пи-рен, 2-аминофлуорен, 4-нитро-о-фенилендиамин. Aldrich Chemical Co., 940 W. St. Paul Ave., Milwaukee, WI 53233, 9-Аминоакридин: Sigma Chemical Co., P. O. Box 14508, St. Louis, MO 63178.

Казаминовые кислоты. Кислый гидролизат казеина, или казаминовые кислоты (без витаминов) фирмы Difco Laboratories, Detroit, MI 48232. Кислый гидролизат казеина: U. S. Biochemical Corp., Cleveland, ОН 44122.

Ароклор-1254. Analabs and Co., 80 Republic Drive, North Haven, CT 06473.

Диметилсульфоксид (спектрально чистый). Schwarz/ /Mann, Orangeburg, N. Y. 10962.

Среда Oxoid № 2. К. C. Biological, P. O. Box 5441, Lenaxa, KS 66215.

Не стерилизованные окисью этилена чашки Петри

(для теста Эймса). Muta-Assay dishes, номер по каталогу 1028, Falcon Laboratories, 1950 Williams Dr., Ox-nard, CA 93030 (805 485—8711).

Имеющиеся в продаже препараты S-9. Доступны из следующих источников: Marketing Manager, Bionetics Laboratory Products, Litton Bionetics, Inc., 5516 Nicholson Lane, Kensington, MD 20795 (301/881-5600), Meloy Laboratories, Inc., 6715 Electronic Dr., Springfield, VA 22151 (703/642-4800).

Благодарность

Нам хотелось бы поблагодарить тех, кто оказал нам помощь при подготовке этой главы: С. Кашнера и У. Чемпнея за советы по методикам локализованного мутагенеза, Линн Харон за указания по описанию теста Эймса, Л. Орнстона за просмотр всей главы и Дебби Чендлер за неоднократное перепечатывание рукописи.

13.11. ЛИТЕРАТУРА

13.11.1. Общая литература

1. Clowes R. С, Hayes W. Experiments in microbial genetics. John

Wiley and Sons, Inc., New York (1968).

Сборник, включающий описание экспериментов с бактериями, бактериофагами и грибами рода Aspergillus-, основу сборника составляют лекции, прочитанные в Хаммерсмитской клинике Лондона (Англия). Описываемые эксперименты охватывают широкую область исследований — от флуктуационного теста с фагами до генетического картирования организмов рода Aspergillus. Составлен по пунктам в стиле лабораторного руководства.

2. Drake J. W. The molecular basis of mutation. Holden-Day, San

Francisco, 1970

Одна из немногочисленных полных монографий по молекулярным механизмам мутаций. Хотя с момента ее выхода прошло несколько лет, она и сейчас представляет большую ценность для общего ознакомления с вопросами мутагенеза.

3. Drake /, W., Baltz R. Н. The biochemistry of mutagenesis. Annu.

Rev. Biochem., 45, 11—37 (1976).

Дополненная монография Дрейка, вышедшая в 1970 г., с акцентом на различные типы нарушения репарации ДНК, которые могут сами по себе оказывать мутагенный эффект.

4. Miller I. Н. Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor

Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y., 1972, [Имеется перевод:

Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике. — М.: Мир, 1976.]

Сборник, включающий описание довольно сложных экспериментов по бактериальной генетике, многие из которых взяты из курса лекций, прочитанных в летнее время в Колд-Спринг-Харборе. Хотя большинство экспериментов относится только к лактозному оперону Е. coli, принципы обработки мутагенами, методы отбора и нахождение характеристик мутантов применимы для широкого круга молекулярио-генетических экспериментов.

13.11.2. Специальная литература

5. Adelberg Е. A., Mandel М., Chen G. С. С. Optimal conditions for mutagenesis by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine in Escherichia coli K12. Biochem. Biophys. Res. Commun., 18, 788—795 (1965).

6. Allen M. Yanofsky C. A biochemical and genetic study of reversion with the A-gene A-protein system of Escherichia coli tryptophan synthetase. Genetics, 48, 1065—1083 (1%3)7. Ames B. N. Identifying environmental chemicals causing mutations and cancer. Science, 204, 587—593 (1979).

8. Ames B. N.t McCann /., Yamasaki E. Methods for detecting carcinogens and mutagens with the Salmonella/mammalian-microsome mutagenicity test. Mutat. Res., 31, 347—364 (1975).

9. Carlton В. С, Whitt D. D. The isolation and genetic characterization of mutants of the tryptophan system of Bacillus subtilis. Genetics, 62, 445—460 (1969).

10. Coulondre C, Miller S. H. Genetic studies of the lac repressor. IV. Mutagenic specifity in the lac I gene of Escherichia coli. J. Mol. Biol., 117, 577—606 (1977).

11. Davis B. D. Isolation of biochemically deficient mutants of bacteria by penicillin. J. Am. Chem. Soc., 70, 4267 (1948).

12. Guerola N., Ingraham J. L., Gerdd-Olmeda E. Induction of closely-linked multiple mutations by nitrosoguanidine. Nature (London), 230, 122—125 (1971).

13. Hong I., Ames B. N. Localized mutagenesis of any specific small region of the bacterial chromosome. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 68, 3158—3162 (1971).

14. Kushner S. R., Maples V. F., Champney W. S. Conditionaly lethal ribosomal protein mutants: characterization of a locus required for modification of SOS subunit proteins. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 74, 467—471 (1977).

15. Lederberg J. Detection of fermentative variants with tetrazolium. J. Bacterid., 56, 695 (1948).

16. Lederberg J. Isolation and characterization of biochemical mutants of bacteria. Methods Med, Res., 3, 5—22 (1950).

17. Lederberg J., Lederberg E. M. Replica plating and indirect selection of bacterial mutants. J. Bacteriol., 63, 399—406 (1952).

18. Lederberg J., Zinder N. D. Concentration of biochemical mutants of bacteria with penicillin. J. Amer. Chem. Soc, 70, 4267—4268 (1948).

19. Miller E. C.t Miller J. A. The mutagenicity of chemical carcinogens: correlations, problems and interpretations, p. 83—119. In A. Hollaender (ed.), Chemical mutagens, vol. 1, Principles and methods for their detection. Plenum Press, New York (1971).

20. Novick R. P, Extrachromosomal inheritance in bacteria. Bacteriol. Rev., 33, 210—263 (1969).

21. Ornston L. N„ Ornston M. K.t Ch

страница 10
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 2" (4.15Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(12.11.2019)