Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 2

Автор Ф.Герхардт

ислотный или пептидный буфер, меркаптаны.

(NH4)2S04

Аминокислотный или пептидный буфер

Нуклеиновые кнслоты, фе-кольные со едниення

Детергенты

Аминокислотный или пептидный буфер

Высокая чувствительность

Быстрота

Простота

Реакция не так сильно зависит от состава белка, как в методе Лоури; быстрота

Быстрота, высокая чувствительность, небольшой объем пробы, удобен для очищенных белков

Результаты варьи руют в зависимости от аминокислотного со става; не подчиняется закону Ламберта —Бэра

Низкая точность или чувствитель ность; результа ты варьируют в зависимости от аминокислотного состава

Необходимость УФ-спектрофо-тометра; помехи за счет нуклеиновых кислот

Использование фосфорной кис лоты

Результаты варьируют в зависимости от аминокислотного состава; использование диоксана

[67, 82, 911

[67, 70, 89]

[86, 87, 89, 105]

[78, 95, 101]

[77, 94]

х К 2 К Л ы о

к а

о о о и >

Продолжение табл. 17.L

Соединение азота

Аналитический метод

Минимальные количества азота

Вещества, мешающие определению

Основные достоинства

Основные недостатки

Источник данных

со

©о

Суммарный азот

Расщепление по Кьельдалю, восстановление N03~ и N02- до NH4+ и анализ на NH4e; отдельное определение азотсодержащих соединений и суммирование результатов11

Определение суммарного азота; можно использовать реакти вы, приготовленные для других опре делений

Длительность аиа- [64, 73,

лиза 79, 98)

а См. сведения об анализе этого типа соединений азота.

" Сюда включены новые методы и (или) некоторые из методов, не применимые к большинству проб без модификаций.

колориметрическом анализе, присутствие в образце окрашенного соединения или вещества в виде частиц может мешать определению, особенно при использовании кювет толщиной 10 см. Ошибку за счет присутствия окрашенных веществ можно уменьшить путем предварительного разбавления раствора, если концентрация N02" достаточно высока. Другим выходом является обработка раствора активированным углем, с помощью которой часто удается удалить мешающие определению соединения. Частицы (например, бактериальные клетки) можно удалить центрифугированием или фильтрованием через мелкопористый 0,45-мкм фильтр.

Обработка проб

Пробы следует анализировать немедленно или хранить замороженными при —20 °С до проведения анализа. Пробы для теста на N02~ нельзя хранить вместе с кислотой. Перед анализом рекомендуется нейтрализовать все пробы до рН 7,0.

Реактивы

Вода, не содержащая N02~. В большинстве случаев дистиллированная вода не содержит N02-. При отсутствии источника такой воды ее можно приготовить самим: на 1 л воды добавляют 1 мл концентрированной H2SO4 (осторожно: H2SO4 — едкое соединение; нельзя допускать ее расплескивания, нельзя насасывать ее в пипетку ртом) и 0,2 мл MnS04 (36,4 г MnS04'H20 на 100 мл дистиллированной воды). Раствор окрашивают в розовый цвет, добавляя 1—3 мл КМп04 (400 мг КМп04) на 1 л.

Сульфаниламидный реактив: 5 г сульфаниламида добавляют к 300 мл дистиллированной воды, содержащей 50 мл концентрированной НС1. (Осторожно! Концентрированная НС1 — едкое вещество. Ее необходимо добавлять в воду медленно. Следует избегать вдыхания ее паров.) Объем доводят до 500 мл дистиллированной водой. Раствор хранят при комнатной температуре несколько месяцев.

Раствор М-(1-нафтил)-этилеидиаминдигидрохлорида: 500 мг М-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида растворяют в 500 мл воды. Раствор хранят в темном месте. Примерно через месяц появляется коричневая окраска, свидетельствующая о том, что реактив испорчен.

Стандартные растворы N02~ [681. Готовят основной раствор NOs", растворяя 0,1411 г NaN02 в 500 мл дистиллированной воды. Используют свежеприготовленный раствор, так как N02" легко окисляется в присутствии воды. Бутыль с основным раствором хранят закупоренной. В 1 мл раствора содержится 50 мкг азота в форме NO2-. Разбавляя основной раствор, готовят стандарты для получения калибровочной кривой.

Методика

1 мл раствора сульфаниламида добавляют к 50 мл пробы и оставляют не менее чем на 2 мин, но не более чем на 8 мин. Нежелательные побочные реакции и распад веществ начинаются после 10 мин [73]. Добавляют 1 мл N- (1-нафтил)-этилендиамина и немедленно перемешивают. Ждут развития окраски по меньшей мере в течение 10 мин и затем определяют оптическую плотность при 543 нм (разд. 16.1.1).

Из основного раствора N02~ с концентрацией 50 мкг/л готовят серию стандартных растворов с концентрациями от 0 до 25 мкг/л нитритного азота. Строят график зависимости между концентрацией [N02~] и оптической плотностью при 543 нм (разд. 16.1.1). Концентрацию нитритного азота в образце определяют по калибровочной кривой или по коэффициенту экстинкции (е) (наклон кривой) с помощью линейной регрессии. Этот коэффициент экстинкции применяют в последующих определениях с теми же реактивами. При использовании новых реактивов получают новую калибровочную кривую.

17.6.2. Нитрат (см. также разд. 16.2.2)

Выбор описываемой здесь методики определения NO3- обусловлен ее относительной простотой, а также тем, что в ней используются реактивы, приготовленные для определения N02". Этот метод основан на восстановлении N03~ в N02~ и последующем анализе N02~. Обычно используют один из двух способов восстановления N03~ в N02~, которые описаны здесь: цинком [81, 92] или кадмием [68, 86].

Восстановление NOs~ в N02~ с помощью Zn — это несложная процедура, включающая реакцию пробы с цинковой пылью в течение 30 мин и фильтрование. Недостаток данной методики — длительность анализа каждой пробы.

Восстановление N02- с помощью Cd, амальгамированного Си, осуществляют, пропуская пробу, обработанную NH4CI (для предотвращения инактивации колонки), через заранее приготовленную колонку с Cd и Си2+.

Проведение самого анализа отличается простотой, однако необходима предварительная подготовка колонки с восстановлением.

После восстановления N03~ в N02~ по любой из приведенных методик последний анализируют описанным выше методом. Поскольку этот метод предназначен для определения суммарного количества N02~, часть пробы следует анализировать на N02~ до восстановления. Содержание N03~ определяют, вычитая полученный результат из суммарного количества NO2".

Обработка проб

Пробы обрабатывают, как описано выше в методике определения нитрита.

Восстановление цинком

Реактивы. Все реактивы рекомендуется готовить на дистиллированной воде, не содержащей N02~ (разд. 17.6.1).

Буферный раствор: 50 мл 0,2 М КС1 смешивают с 34 мл 0,2 н. НС1 и объем доводят водой до 400 мл. рН доводят до 1,5 с помощью НС1.

NH4CI: 2%-ный раствор (вес/объем). Порошок цинка.

Методика. Пробы по 25 мл вносят в 50-мл колбы, закрывающиеся пробками, добавляют к ним 1,0 мл 2%-ного NH4CI и 2 мл буфера и нагревают до 20— 25 °С. Добавляют по 0,2 г цинкового порошка и оставляют на 30 мин, изредка помешивая. Частицы цинка удаляют фильтрованием через крупнопористую фильтровальную бумагу.

Восстановление кадмием

Реагенты. Раствор сульфата меди: 2%-ный (вес/объем) раствор.

Концентрированный раствор NH4C1: 175 г NH4C1 растворяют в 500 мл дистиллированной воды.

Разбавленный раствор NH4C1: 1 часть концентрированного раствора NH4C1 разбавляют 40 частями воды, ие содержащей ЫОг"1, для получения концентрации 4,38 г в 500 мл воды.

Приготовление колонки. Верхняя часть колонки размером 1X30 см специально приспособлена для одновременного внесения всей пробы. Нижняя часть колонки должна быть снабжена краном типа бюреточного или же соединена с помощью резиновой трубки с пружинным зажимом, позволяющим останавливать поток, что необходимо для предотвращения высыхания сорбента в колонке. На дне колонки должна быть стекловата или тампон из тонкой медной проволоки. Небольшое количество стекловаты или медных опилок часто помещают в верхнюю часть колонки для предотвращения нарушения слоя кадмиево-медных амальгамированных опилок при внесении пробы.

Кадмиевые опилки получают, обрабатывая бруски чистого кадмия (ч. д. a.; reagent grade) грубым ручным металлическим напильником. Отбирают фракцию, проходящую через 2-мм сито, но задерживающуюся на 0,5-мм сите. Приблизительно 50 г опилок перемешивают с 250 мл 2%-ного CuS04-5H20 до тех пор, пока не исчезнет голубая окраска раствора и над осадком не начнут появляться полуколлоидные частицы меди. Суспензии дают отстояться в течение 10 мин. Колонку заполняют разбавленным раствором NH4CI или надосадочной фракцией, полученной в результате амальгамирования Cd — Си; затем медленно вливают в нее суспензию опилок Cd — Си до образования столбика высотой около 30 см. Колонку трижды промывают 100 мл разбавленного раствора NH4CI. Скорость потока устанавливают около 10 мл/мин.

Методика. К 100 мл пробы добавляют 2 мл концентрированного раствора NII4CI. 5 мл этого раствора наносят на колонку и позволяют жидкости подняться до верхней части колонки. Это делается для того, чтобы при введении в колонку оставшейся части пробы не возникало ошибок за счет остатков предыдущей.

Вводят оставшуюся часть пробы в колонку. Первые 25—30 мл элюата отбрасывают, а последующие 50 мл собирают для анализа. Остальную часть элюата отбрасывают. Колонку можно использовать повторно до 100 раз; при этом промывания ее между анализами обычно не требуется. Однако, если колонку не используют в течение нескольких часов, ее следует промыть разбавленным раствором хлорида аммония.

50 мл отобранного для анализа элюата тестируют на N02~ (разд. 17.6.1) как можно быстрее после восстановления.

17.6.3. Определение аммония в реакции с образованием индофенолового синего [100]

Для определения концентрации NH4+ разработано много методов (табл. 17.1). Один из наиболее простых методов основан на реакции аммиака, гипохлорита и фенола с образованием индофенолового синего. Реакцию катализируют ионы Мп2+. Окраску измеряют с помощью колориметра или спектрофотометра при 630 нм [64, 68, 99]. Неудобство этого способа заключается в необходимости применения фенола и неустойчивости реактивов.

Другим простым способом (по мет

страница 62
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 2" (4.15Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(15.11.2019)