эфира (2:1, по объему) в течение трех дней для удаления липидов, отличных от ПГБ. Наконец, гранулы экстрагируют горячим диэтиловым эфиром, измельчают в порошок, сушат в вакууме и определяют сухой вес гранул.

После высушивания гранулы диспергируют в 0,02 М фосфатном буфере с помощью аппарата для измельчения тканей и ультразвукового генератора для получения стабильной концентрированной суспензии. Суспензию стерилизуют автоклавированием и хранят в холодильнике. Расчет количества концентрированной суспензии, которое необходимо добавить в расплавленный агар для получения конечной концентрации 0,25% (вес/объем) в верхнем слое, приведен в разд. 20.1.50.

20.4.16. Калий-фосфатный буфер

Готовят 0,2 М растворы 1) К2НР04 и 2) КН2Р04. Растворы смешивают в пропорциях, указанных в табл. 20.2, для получения нужного значения рН. Смесь (0,2 М фосфатный буфер) разбавляют в дальнейшем для получения нужной молярности. См. также разд. 6.1.2.

20.4.17. Фосфатно-солевой буфер (ФСБ)

Основной раствор*10:

Na2HP04, безводный, химически чистый (reagent grade) 12,36 г

NaH2P04*H20, химически чистый (reagent grade) 1,80 г

NaCI, химически чистый (reagent grade) 85,00 г

Компоненты растворяют в дистиллированной воде до конечного объема 1000 мл.

Стандартная смесь летучих жирных кислот (~ 1 мэкв/100 мл):

Основной раствор 100 мл

Дистиллированная вода 900 мл

20.4.18. Стандартные растворы для газовой хроматографии [7]

Стандартная смесь летучих жирных кислот (~1 мэкв/100 мл):

Муравьиная кислота 0,037 мл

Уксусная кислота, ледяная 0,057 мл

Пропионовая кислота 0,075 мл

Изомасляная кислота 0,092 мл

Масляная кислота 0,091 мл

Изовалериановая кислота 0,109 мл

Валериановая кислота 0,109 мл

Изокапроновая кислота 0,126 мл

Капроновая кислота 0,126 мл

Гептановая кислота 0,142 мл

Дистиллированная вода 100 мл

При использовании стандартной смеси 1 мл раствора подкисляют и экстрагируют эфиром, применяемым для газовой хроматографии.

Стандартная смесь спиртов. Ниже указаны количества всех компонентов, которые необходимо добавить к 100 мл дистиллированной воды для получения конечной концентрации, указанной в скобках.

Этанол 0,1 мл (1,7 мМ)

Пропанол 0,035 мл (0,5 мМ)

Изобутанол 0,005 мл (0,05 мМ)

Бутанол 0,01 мл (0,1 мМ)

Изопентанол 0,005 мл (0,05 мМ)

Пентанол 0,005 мл (0,05 мМ)

1 мл смеси экстрагируют эфиром, применяемым для газовой хроматографии.

Стандартная смесь нелетучих кислот (~1 мэкв/100 мл):

Пировиноградная кислота 0,068 мл

Молочная кислота, 85%-ный сироп 0,84 мл

Щавелевоуксусная кислота 0,06 г

Щавелевая кислота 0,06 г

Метилмалоновая кислота 0,06 г

Малоновая кислота 0,06 г

Муравьиная кислота 0,06 г

Янтарная кислота 0,06 г

Дистиллированная вода 100 мл

1 мл смеси метилируют и экстрагируют хлороформом.

20.4.19. Гипохлоритный реактив Уильямсона и Уилкинсона [98]

200 г порошка хлорной извести мелко растирают с небольшим количеством дистиллированной воды и доводят объем до 1 л. Помешивая, добавляют 1 л 30%-ного (вес/объем) раствора Na2C03. Смесь оставляют на 2— 3 ч, периодически помешивая. Затем ее фильтруют через бумагу, доводят рН фильтрата до 9,8 с помощью конц. НС1, подогревают до 37 °С и удаляют осадок фильтрованием. Прозрачный фильтрат хранят в закупоренной бутылке в холодильнике. Раствор стабилен в течение нескольких месяцев.

20.5. ЛИТЕРАТУРА 20.5.1. Общая литература

1. Bodily Н, Updyke Е. L., Mason J. О. (ed). Diagnostic procedures for bacterial, mycotic and parasitic infections, 5th ed., American Public Health Association, Inc., New York, 1970.

В книге описаны микроскопические, культуральные и биохимические методы идентификации патогенных организмов.

2. Buchanan R. Е., Gibbons N. Е. (ed.). Bergey's manual of determinative bacteriology, 8th ed. The Williams & Wilkins Co., Baltimore, 1974.

Книга представляет собой наиболее всестороннее и широко используемое таксономическое описание бактерий. Содержит подробные характеристики почти всех описанных видов, а также ?а0лиды для дифференциации, ключи и иллюстрации,.

3. Cowan S. Т., Cowan and Steel's manual for the identification of

medical bacteria, 2nd ed., Cambridge University Press, London,

1974.

Пособие полезно не только для медиков-бактериологов, но и специалистов по общей бактериологии. Содержит обширную информацию по методам изучения, приготовлению сред, принципам классификации, идентификации и номенклатуры.

4. Hardy R. W. F., Burns R. С, Holsten R. D. Applications of the acetylene-ethylene assay for measurement of nitrogen fixation, Soil Biol. Biochem.. 5, 47—81 (1973).

5. Hardy R. W. F., Holsten R. T)., Jackson E. K, Burns R. C. The acetylene-ethylene assay for N2 fixation: laboratory and field evaluation, Plant Physiol., 43, 1185—1207 (1968).

Эти две статьи содержат обширную практическую информацию по использованию метода восстановления ацетилена как в лабораторных, так и в полевых условиях. Подробно обсуждается хроматографический анализ этилена, а также различные факторы, влияющие иа восстановление ацетилена.

6. Hedeti С, Hleni Т. (ed.). New approaches to the identification of microorganisms, John Wiley and Sons, Inc., New York, 1975. Описаны автоматизированные, а также электронно-вычислительные и микрометоды, связанные с характеристикой и идентификацией бактерий.

7. Holdeman L. V.t Cato Е. P., Moore W. Е. С. (ed.). Anaerobe laboratory manual, 4th ed. Virginia Polytechnic Institute and State University, Blacksburg, 1977.

В книге содержатся таблицы для идентификации анаэробных бактерий, а также описаны методы их изучения и состав сред для выращивания. Подробно освещаются приготовление и использование предварительно восстановленных сред, а также способы культивирования.

8. Holding А. Л, Colee J. G. Routine biochemical tests, p. 2—32.

In: J. R. Norris and D. W. Ribbons (ed.), Methods in microbiology, vol. 6A, Academic Press, Inc., New York, 1971.

Описаны принципы и методики осуществления большого числа тестов для получения биохимических характеристик бактерий.

9. Holt J. G. The shorter Bergey's manual of determinative bacteriology, The Williams & Wilkins Co., Baltimore, 1977.

Руководство содержит все таблицы, описания родов и иллюстрации из полного „Определителя Берги", однако в нем нет

подробного описания видов. Предназначено специально для

целей идентификации бактерий. [Имеется перевод: Дж. Хоулт

(ред.). Краткий определитель бактерий Берги. — М.: Мир,

1980.]

10. Lenette Е. Н., Balows A., Hausler W. J., Jr., Truant J. P. (ed.). Manual of clinical microbiology, 3rd ed., American Society for Microbiology, Washington, D. C, 1980.

В книге описаны микроскопические, культуральные, биохимические и серологические методы идентификации патогенных микроорганизмов.

И. Postgate J. R. The acetylene reduction test for nitrogen fixation, p. 343—356. In: J. R. Norris and D. W. Ribbons (ed.), Method щ microbiology, vol 6В, Academic Press, Inc, New York, 1972 Краткий обзор принципов и методик выполнения анализов с восстановлением ацетилена для обнаружения иитрогеназной активности

12. Skerman V В D A guide to the identification of the genera of bacteria. The Williams & Wilkins Co, Baltimore, 1967 Руководство составлено на основе VII издания „Определителя бактерий Берги". Методический раздел содержит богатый материал по методам идентификации и приготовлению сред для различных видов бактерий

13 Skerman V В D Abstracts of microbiological methods, Wiley Interscience, New York, 1969

Книга освещает широкий набор физиологических и биохимиче ских рутинных методов, почерпнутых из оригинальных статей

20.5.2. Специальная литература

14 Adacht Т, Murooka Y, Harada Т, J Bacteriol, 116, 19—24 (1973)

15 Adter J, Science, 153, 708—716 (1966)

16 Atdrtdge К E, Gardner В В, Clark S J, Mat sen J M, J Clin Microbiol, 7, 507—513 (1978)

17 Back A E, Oberhofer T. R, J. Clin Microbiol, 7, 312—313 (1978)

18 Balderston W L, Sherr B, Payne W J, AppI Environ Microbiol , 31, 504—508 (1976)

19 Bernaerts M J, De Ley J, Nature (London), 197, 406—407 (1963)

20 Board R G, Holding A J, J Appl Bacteriol, 23, xi (1960)

21 Botsford J L, DeMoss R D, J Bacteriol, 105, 303—312 (1971)

22 Burger H, Zentralbl Bakteriol Parasitenkd Infektionskr Hyg Abt I Ong, 202, 97—109 (1967)

23 Campbell N E R, Evans H J, Can J Microbiol, 15, 1342^1343 (1969)

24 Cato E P, Moore W E С, Can J Microbiol, 11, 319—324 (1965)

25 Chnstensen W B, J Bacteriol, 52, 461—466 (1946)

26 Chnstensen W B, Res Bull No 1, Weld County Health Depart ment, Greeley, Colo (1949)

27 Cohen Bazire G, Ststrom W R, Stanter R Y, J Cell Comp Physiol, 49, 25—68 (1957)

28 Daesch G, Mortensen L E, J Bacteriol, 110, 103—109 (1972)

29 Detafteld F P, Doudoroff M, Palleront N J, Lusty С J, Con-topoulos R, J Bacteriol, 90, 1455—1466 (1965)

30 Dobereiner J, Day J M In W E Newton and С J Nymans (ed), Simposium of nitrogen fixation, p 518—538 Washington State University, Pullman, 1976

31 Dowda H, J Clin Microbiol, 6, 605—609 (1977)

32 Elder В L, Trujtlto I, Blasevic D J, J Clin Microbiol, 6, 312— 313 (1977)

33 Evans / B, Nwen С F, J Bacteriol, 59, 545—550 (1950).

34 Ewtng W И, Davis В R, Reams R W, Public Health Lab, 15,

153 (1957)

35 Finegotd S M, Martin W J, Scott E G Bailey and Scott's

diagnostic microbiology, 5th ed , С V Mosby, St Louis, 1978

36 Fung D Y С, Hart man P A , Can J Microbiol, 18, 1623—1627

(1972)

37 Fung D Y C, Hart man P A In С G Heden and Illeni T (ed ),

New approaches to the identification of microorganisms, p 385—

392, John Wiley & Sons, Inc, New York, 1975

38 Fung D Y C, Miller R D, Appl Microbiol, 20, 527—528 (1970)

39 Gallien R In С G Heden and 1 Hem T (ed ), New approaches

to the identification of microorganisms, p 385—392, John Wiley

and Sons, Inc, New York, 1975

40 Guthertz L S, Okuluk R L, Appl Environ Microbiol, 35, 109—

112 (1978)

41 Hansen S L, Hardesty D R, Meyers В M, Appl Microbiol, 28,

798—801 (1974)

42 Haynes W C, J Gen Microbiol, 5, 939—950