Биологический каталог




Методы общей бактериологии. Том 3

Автор Ф.Герхардт

озолей, петле дают остыть либо на воздухе, либо при соприкосновении с внутренней стенкой емкости или поверхностью агара, где до этого заведомо не росла культура. После использования петли и иглы предпочтительнее стерилизовать в электрической или газовой печи, специально предназначенной для этой цели, а не нагреванием на открытом пламени. В таких печах имеется заслонка, задерживающая брызги. В продаже имеются петли для внесения инокулята одноразового пользования, которые проще обеззараживать погружением в дезинфицирующий раствор, чем нагреванием.

При посеве штрихом на неровную поверхность агара происходит вибрация петли или иглы, что приводит к образованию аэрозоля. Как правило, этой проблемы не существует, если посев делают на гладкую поверхность агара, поэтому рекомендуется не высевать культуру в чашки с неровной поверхностью агара.

Вода, появляющаяся в чашках Петри в результате синерезиса, образует в перевернутой чашке пленку между ребром чашки и крышкой в которой могут содержаться жизнеспособные бактерии. При открывании чашки эта пленка разрывается, в результате чего возникают аэрозоли. Сообщающиеся с внешней средой пластмассовые чашки Петри, у которых крышка касается края чашки в трех точках, менее подвержены этой опасности. Уменьшает, но не предотвращает образование аэрозолей фильтровальная бумага, вставленная в крышки. Если чашки заведомо мокрые, то их следует открывать в боксе.

Менее вероятно высвобождение аэрозолей при открывании бутылей с завинчивающимися пробками или закрытых тампонами пробирок. Но все же это может произойти, когда во время открывания разрывается пленка между краем и прокладкой. Аэрозоли образуются при удалении ватных пробок или крышек с колб, бутылей и центрифужных стаканов сразу же после взбалтывания или центрифугирования. Опасно вынимать пробки, намокшие в результате невертикального положения колбы или центрифужного стакана. Пробки могуг слегка увлажняться при центрифугировании, если в ходе его происходит незначительное вспенивание. В связи с этим все жидкие культуры с инфекционным материалом необходимо открывать в безопасном боксе, надев перчатки и лабораторную одежду с длинными рукавами.

Аэрозоль может образовываться при вскрытии запечатанной ампулы с лиофилизованной или жидкой культурой, поэтому ампулы следует вскрывать в безопасном боксе. Собирая осколки ампулы, необходимо позаботиться о том, чтобы не порезать перчатки или руки, чтобы разбитое стекло не попало в глаза, на лицо или не осталось неубранным. После вскрытия ампулы суспензия бактерий не должна загрязняться посторонними микроорганизмами или дезинфицирующими веществами. Этого добиваются, работая в безопасном боксе в перчатках. Для того чтобы вскрыть ампулу, прежде всего делают насечку пилкой около шейки ампулы. Саму ампулу оборачивают ватой, пропитанной дезинфицирующим веществом, и вскрывают надломом в месте насечки, предварительно убедившись, что держат ее вертикально. Другим способом в месте насечки делают трещину, прикладывая к нему накаленную проволоку или стеклянную палочку, затем оборачивают ампулу пропитанной в дезинфицирующем веществе ватой и открывают ее надломом. Вату и верхушку ампулы немедленно бросают в дезинфицирующий раствор. Содержимое ампулы растворяют путем медленного добавления жидкости, стараясь не допускать образования аэрозоля. Раствор перемешивают, следя за тем, чтобы не было пузырьков, и переносят в приготовленную емкость.

Для удобства открывания выпускаются ампулы с предварительно нанесенной насечкой, однако такие ампулы менее надежны: они могут разбиваться во время работы с ними или при хранении. Ампулы с жидкими культурами вскрывают аналогичным образом.

Сбор культур, выращиваемых на куриных эмбрионах, весьма опасен. При его проведении сильно загрязняются скорлупа и подносы с яйцами, окружающая среда и руки экспериментатора. Работу подобного рода следует выполнять в безопасных боксах, часто пользуясь подходящим дезинфицирующим веществом.

24.2.5. Центрифугирование

При центрифугировании инфекционных бактериальных суспензий следует пользоваться безопасными центрифужными гильзами, а настольные центрифуги должны находиться в безопасных боксах класса I, имеющих панель с перчатками или окна для рук, которые можно открывать и закрывать.

Центрифужные стаканы и гильзы наполняют и открывают в безопасном боксе класса I. Если центрифугируют вне бокса, то применяют защитную гильзу. После заполнения и запечатывания ее протирают или окунают в дезинфицирующий раствор. По истечении необходимого времени гильзу обмывают чистой водой, поскольку некоторые дезинфицирующие вещества вызывают коррозию.

Перед центрифугированием проверяют стаканы, и если находят трещины или сколотые края, то такими стаканами не пользуются. Внимательно осматривают внутреннюю поверхность гильз и ликвидируют шероховатости или приставшие частицы. Проверяют также состояние резиновых прокладок.

Между стаканом и гильзой заливают дезинфицирующий раствор, чтобы в том случае, если разобьется стакан, материал подвергся дезинфекции. К тому же это создает хорошую амортизацию. Следует позаботиться о том, чтобы культуральный материал не загрязнился дезинфицирующим веществом. Рекомендуется также не забывать о том, что если стакан разобьется, то из-за высокой концентрации клеток и большого разбавления дезинфицирующего вещества инфекционный материал может дезинфицироваться не полностью.

Надосадочную жидкость лучше не выливать из центрифужных стаканов, а отсасывать. Если ее необходимо слить, протирают внешний край стакана дезинфицирующим раствором, так как, если этого не сделать, на следующей стадии может образоваться аэрозоль. Отсасывают надосадочную жидкость с помощью вакуумной системы, содержащей безопасные емкости и фильтры.

Центрифужный стакан заполняют таким образом, чтобы край, крышка или ватная пробка не становились влажными от культуры. Завинчивающиеся крышки или крышки, охватывающие края сверху, безопаснее крышек, входящих внутрь. В последнем случае между крышкой и краем стакана обычно собирается некоторое количество жидкости. Даже стаканы с завинчивающимися крышками небезопасны: если края запачканы и неплотно прилегают к крышке, некоторое количество жидкости может попасть на внешнюю стенку стакана.

Не рекомендуется закрывать центрифужные стаканы алюминиевой фольгой, потому что при центрифугировании она часто слетает или рвется.

Стаканы и гильзы необходимо тщательно уравновешивать. Не следует смешивать гильзы, стаканы и пластмассовые вкладыши из разных наборов. Если на этих предметах не указан вес, удобно пометить каждый комплект своей краской.

Металл, из которого сделаны высокоскоростные роторы, постепенно изнашивается, и если их используют на разных центрифугах, то для каждого заводят тетрадь, в которой отмечают количество часов работы на предельной или пониженной скорости. Если это не соблюдается, может произойти опасная и дорогостоящая поломка. Чтобы предотвратить коррозию или другие дефекты, которые могут привести к развитию трещин^ необходимы частые проверки роторов, их очистка и сушка. Если ротор обрабатывают дезинфицирующим раствором, то после этого его промывают водой и высушивают. Регулярно проверяют состояние резиновых колец и крышек центрифужных стаканов и смазывают их в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя. Если стаканы сделаны из различных материалов (например, целлулоидные, полипропиленовые, из нержавеющей стали), следят за тем, чтобы использовались крышки, предназначенные для соответствующих типов. Крышки часто внешне похожи, но если их надевают на несоответствующие им стаканы, последние могут давать течь. При хорошем хранении стаканов и роторов и правильном с ними обращении этого не происходит.

24.2.6. Перемешивание и разрушение клеток

При использовании для разрушения бактерий смесителей, миксеров, ультразвуковых дезинтеграторов, коллоидных мельниц, струйных мельниц, дробилок, а также ступок с пестиками соблюдают следующие правила.

Используют биологически безопасный бокс.

Используют безопасные смесители, в которых предотвращена утечка жидкости в месте входа вращающейся оси в дно сосуда. В случае отсутствия защиты от утечки перед работой необходимо убедиться в том, что ее нет. Для этого проводят предварительные испытания, используя стерильную воду, физиологический раствор или раствор метиленового синего.

Во время работы на смеситель вешают полотенце, смоченное дезинфицирующим раствором. Сразу после работы смеситель и остатки стерилизуют.

Для смешивания инфекционных материалов стараются не использовать стеклянные емкости.

Иногда для предотвращения разрушения ножей и уменьшения нагревания содержимого требуется охлаждать емкость смесителя.

После прекращения работы смесителя емкость не открывают по крайней мере в течение 1 мин, давая возможность осесть аэрозолю.

24.2.7. Обращение с животными

Животные способны распространять патогенные микроорганизмы через слюну, мочу или экскременты. В отсутствие специальной информации все животные должны рассматриваться как разносчики инфекции. Чтобы уменьшить разнесение пыли и находящихся в клетке отходов, с ними обращаются очень осторожно. Использованные клетки, где содержались животные, стерилизуют автоклавированием вместе с отбросами, емкостями и поилками.

Когда кормят, поят или забирают из клеток инфицированных животных, надевают плотные перчатки. Нельзя передвигать предметы в клетке голыми руками.

При инъекции животным бактерий надевают защитные перчатки. Следует ограничить движения животных (например, с помощью специальной небольшой клетки для приматов) или ввести им успокаивающие средства, чтобы избежать распространения опасного биологического материала или заражения других животных и персонала.

Экспериментальные животные подвергаются воздействию аэрозолей бактерий в вентилируемых клетках, в безопасных боксах класса III или в комнатах, где персонал пользуется вентилируемыми костюмами.

Большую опасность представляют огромные клыки крупных обезьян. Они играют важную роль в передаче естественно возникающих опасных об

страница 34
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45

Скачать книгу "Методы общей бактериологии. Том 3" (2.64Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(21.09.2019)