Биологический каталог




Транскрипция и трансляция. Методы

Автор Б.Хеймс, С.Хиггинс

дрофолатредуктаза (DHFR) 41 Диэтилпирокарбонат (ДЭПК) 217—

218, 255, 256 ДНК, введение радиоактивной метки 174—176

— вирусов эукариот, упаковка in

vitro 32

— выделение из папилломавируса

быка по методу Хирта 46

— высокомолекулярная хромосом-

ная, выделение 16

— геномная, использование при

трансформации 18

— микроинъекция в клетки млекопи-

тающих методом «прокалывания» 28—29

-----с помощью микропипетки 26—28

---ооциты Xenopus, анализ

РНК-транскриптов, картирование З'-концов 84

--------5'-концов 79

-------- с помощью

нуклеазы S1 79, 81—82

------—---наращивания затравки 84

---— — выделение РНК после инъекции 75—76

-----идентификация РНК-полимераз 84—85

----- исследование регуляторных белков 87

------сопряженной

транскрипции—трансляции 86— 87

-----конформация, стабильность и концентрация инъецированной ДНК 69—70

Предметный указатель

385

-----метод центрифугирования 72—74

<— ·----мечение белков, кодируемых инъецированной ДНК 75

------РНК-транскриптов

74—75

.—----определение сайтов

инициации транскрипции 79—84

¦-------терминации

транскрипции 85

— ---- основное оборудование 68—69

----- получение ооцитов

68

.-----посттранскрипционный процессинг 85

—----«слепой» метод 70—

73

-----сплайсинг РНК 68, 85

¦— очистка имеющихся в продаже препаратов 18—19

— разделение цепей 174, 176

— рекомбинантная плазмидная, вы-

деление 17—18, 46, 201, 223—224

— сверхспиральная 98, 244—245

— удаление из препаратов РНК 99

— фаговая, выделение 235

— электрофорез в полиакриламид-

ном геле 176 ДНКаза, определение активности 116

— I, применение при выделении

РНК 123

ДНК-Целлюлоза 165

ДЭАЭ-декстрановый метод трансфекции клеток млекопитающих 24— 26

Зьюби, выделение плазмидной ДНК 223—224

—---оборудование и реактивы 217—218

—---оптимальные концентрации ионов магния и БЗО-экстрак-та 224—229

----получение БЗО-экстракта

221—223

Иммунопреципитация продуктов трансляции эукариотической мРНК в бесклеточных экстрактах 303, 305

--¦----ооцитах Xenopus

352—353

Кальцийфосфатная методика трансфекции клеток млекопитающих, абсорбция копреципитата ДНК— фосфат кальция 20

—----время предселективной экспрессии 20—21

-----ДНК-носитель 12г

18-19.

-----донорная ДНК 16

---— — котрансформация

23—24

-----кривые «доза — ответ» 21—22

----- основная процедура

11—16

--—--отбор на метоцеле 15

----- реципиентные клетки

19

----- «усилители» экспрессии 22—23

Картирование З'-концов РНК-транскриптов с помощью нуклеазы S1 84. См. также Нуклеаза S1

-----РНКазы T1 144—147

— 5'-концов РНК-транскриптов ме-

тодом наращивания затравки 84

---. — «отпечатков пальцев» 99

---с помощью нуклеазы S1

60—61, 79, 81—82, 174—179. См. также Нуклеаза S1 ----- прерванной транскрипции 94—99 _____РНКазы T1 144—147

— сайтов инициации транскрипции

см. Картирование 5'-концов-РНК-тр анскриптов

25—953

386

Предметный указатель

Колифаг MI3mp7 371

— id 371

Ксантин-гуанин—фосфорибозилтрансфераза (XGPRT) 40

?-Лактамаза 29, 235—236 Липосомы как переносчики генов

29—31 Луриа агар 189

Матричная РНК (мРНК), выбор метода выделения 257

-- выделение из вирусов 268—270

----полисом 262—268

--— — целых клеток или цитоплазматических фракций 257— 262

----методом селективной гибридизации 274 ---ро1у(А)--мРНК 273—274

— — защита от загрязнения

РНКазой 254, 255, 272—274 -- использование растворов LiCl

и мочевины 262 ¦---кэпирование 84, 105, 131—136,

155—156

--- метод «смещения равновесия»

318

-- микроинъекция в ооциты Xenopus, биологические тесты для выявления синтезированных белков 331, 344

------выбор радиоактивных предшественников для введения метки 346—348

------двумерный гель-электрофорез 354—356

--- —---извлечение яичника из лягушки 334

------иммунопреципи-

тация 352—353

------ ингибирование

трансляции 358—359

------ компартментация

и секреция чужеродных белков 330

------ культивирование

ооцитов после инъекции 346

-----·--необходимое оборудование 336—340

------ подбор концентрации РНК 343—344

------ подготовка ооцитов к инъекции 334—336

------ посттрансляционная модификация белков 329, 331, 358, 360

------процедура введения метки 349

— —----сравнение с бес-

клеточными системами 327—331

— — ---- стабильность

инъецированных мРНК 343

------ субклеточное

фракционирование ооцитов 350— 352

---—--трансляция инъецированных мРНК 327—329

--— —--электрофорез в

ПААГ—ДСН без восстановления 353—354

------·---в восстанавливающих условиях 353

-----— энуклеация ооцитов 356—358

--очистка poly (А)+-мРНК аффинной хроматографией на oligo(dT)-целлюлозе 271—272

—-----·--poly (U)-сефарозе 151—153, 272—273

--¦--гель-электрофорезом

270—271

--¦--связыванием с немоди-

фицированной целлюлозой и фильтрами типа Millipore 273

--¦--фенольной экстракцией

при нейтральном рН 273

----¦ центрифугированием в

градиенте плотности -сахарозы 270

--процессинг предшественников

Предметный указатель

387

см. Процессинг посттранскрипционный

-- трансляция см. Трансляция

Мембранные везикулы из Е. coli, получение и использование 237, 239, 240

Мембраны мнкросомные, выделение из поджелудочной железы собаки 309—311

Метоцель, отбор трансформированных клеток 15—16

Модификации посттрансляционные в ооцитах Xenopus 329, 331, 358, 360. См. также Сигнальные последов ательности

Нуклеаза микрококковая, обработка лизата ретикулоцитов 285—287

---экстрактов зародышей пшеницы 293

---- клеток асцитной опухоли

Эрлиха 299

— S1, картирование З'-концов РНК-

транскриптов 84 ---5'-концов РНК-транскриптов с использованием радиоактивной ДНК 59—60, 79—81, 174—180

--------РНК 99—

101

¦---сайтов инициации транскрипции 173—180

— — количественное определение

специфических РНК-транскриптов 99—101, 169—172

--удаление неспецифической РНК

99

Нуклеазы см. ДНКаза, РНКаза,

Нуклеаза S1 Нуклеосомы 184

Нуклеотиды меркурированные, использование при выделении РНК-транскриптов 137—138, 166—169

2',5'-Олигоаденилаты как ингибиторы белкового синтеза 3, 19

Oligo(dT)-целлюлоза, очистка мРНК

271—272 Онкогены 43

Папилломавирус (BPV) 46—48 Паповавирус 33 Плазмида pACYC184 188

— pAG60 39

— ? AT 153, 223, 365

— pBPVl-Dl 45

— pBpV-Hl 45

— pBPV-rfe 45

— pBR322 101, 210, 226, 365

— pBR325 223, 234, 235, 245, 249

— pBS42 188

— pKN410 247

— pLG281 235

— pLG517 188

— pMX 176, 177

— pSClOl 200

— pSV2-cat 39

— pSV2-dhfr 39

— pSV2-gpi 39

— pTKl 12, 52—55

— рТКЮ 52

— pTKBVl-201 54

— рТКВХЭ 54

— pTKel 52

— ??????-? 59, 60

— pTKlMOEl 54

— pTKMOLTRl 52

— pTKlSVl 54

Поливинилсульфат как ингибитор РНКазы 274

Полисомы, выделение мРНК 268

— иммунопреципитация 266—267

— получение методом высокоско-

ростного центрифугирования 262—263

--осаждением солями магния

264

— связанные и свободные, разделе-

ние 265—266

— фракционирование по размерам

266

— центрифугирование в градиенте

25*

388

Предметный указатель

плотности сахарозы 262—267, 319

Предшественники белков см. Модификации посттрансляционные, Сигнальные последовательности

Протеаза, определение активности 117

— предохранение белков от ее воз-

действия 115, 214 Протопласты, слияние для переноса генов 31

Процессинг посттранскрипционный предшественников мРНК, кэпи-рование 84, 105, 131—136, 155— 156

----метилирование 105,

154—155 ---- полиаденилирование

105—108, 151—154

----сплайсинг 85, 105, 156

---рРНК 156

---тРНК 156

Регуляторные белки в ооцитах Xenopus, определение 87

— факторы в ядрах, определение

157

Репрессор трансляции эукариотической мРНК в лизате ретикулоцитов 280, 286, 318

Рибонуклеозидтрифосфаты меркури-рованные, использование для выделения РНК-транскриптов 168

РНК, выделение из клеток млекопитающих 36. См. также Матричная РНК (мРНК)

--- ооцитов Xenopus после инъекции 75—76

---экстракта клеток HeLa 93—

94

--- ядер 123

— выход из ядер 156—157

— изучение структуры 5'-конца ме-

тодом «отпечатков пальцев» 99

— количественное определение. 37,

121, 123, 138—142, 171—173

— метилирование 105, 154—155

— определение размеров 79, 80—81,

95—96, 101, 124—125, 142—144, 270

— полиаденилирование 151—154

— полиаденилированная, выделение

151—153, 271—274. См. также Матричная РНК (мРНК)

--определение длины poly (А) -

последовательностей 152—154

—· процессинг см. Процессинг посттранскрипционный

—¦ фракционирование с помощью гель-электрофореза 100, 125, 270—271

--— —· центрифугирования в

градиенте плотности сахарозы 124, 270—271

— электрофорез в ПААГ 125, 270 РНКаза, защита от ее действия

115—117, 217—218, 255—257, 260, 262, 274—275

— определение активности 116

— Т1, картирование концов РНК-транскриптов 144—147

--расщепление РНК 126, 142—

146

РНК-зависимая транскрипция 180 РНК-полимераза Е. coli, выделение 162—164

-- транскрипция хроматина см.

Хроматин РНК-транскрипты, анализ с помощью

гель-электрофореза 77

— количественная оценка с по-

мощью дот-гибридизации 138— 142

Ртуть-агароза, использование при выделении РНК-транскриптов 128—129

— получение 129—-130 Ртуть-целлюлоза, использование при

выделении РНК-транскриптов 128—130

— получение 130

Предметный указатель

389

Сайты рестрикции, идентификации с помощью систем транскрипции-трансляции in vitro 249

Сверхспирализация, стимуляция транскрипции 244—245

Сефароза с ковалентно пришитым белком А, использование при иммунопреципитации продуктов трансляции 305, 306

— тиолированная, использование для

выделения РНК-транскриптов 166—169

Сигнальные последовательности, выделение микросомных мембран 309

— — изучение с помощью мембран-

ных везикул 237, 239—240 --отщепление при переносе белков через мембраны 311—313

-- сравнение продуктов белкового

синтеза in vivo и in vitro 237— 240

— — узнавание с помощью специ-

фического белка 312 Синтез бе

страница 85
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88

Скачать книгу "Транскрипция и трансляция. Методы" (6.57Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(17.10.2019)