лков, определение включившейся радиоактивности 225— 229, 283—285

— РНК, количественное определение

121—123, 169—173 Сплайсинг 68, 85, 105, 156

Тимидинкиназа (ТК), определение активности 34

— отбор tt-трансформантов 12—16,

33—35

— тест на наличие мРНК 35, 37

— транскрипция гена 10—24 Тионуклеозидтрифосфаты, исследование РНК-транскриптов 126—131, 138, 150—151

Транскрипция в бесклеточных экстрактах при участии РНК-полимеразы I 89—90, 108—109

.------- РНК-полимеразы II 89—99, 101—105

------РНК-полимеразы III 89—90, 109

-- ооцитах Xenopus при участии

РНК-полимеразы I 67—68, 84— 85

------РНК-полимеразы II 65—67, 77—85

--· трансфицированных клетках

при участии РНК-полимеразы II 10—61

--хроматине при участии РНК-полимеразы II 118, 161, 164

--ядрах при участии РНК-полимеразы I 119, 121, 123

-----РНК-полимеразы II

119—123

— идентификация РНК-полимераз

84—85, 97—98, 119, 121—123

— инициация синтеза РНК 127—136

— количественное определение 37,

121—123, 138—142, 169—173

--— РНК-транскриптов 37, 121,

123, 138—142, 171—173

— определение концов РНК-транск-

риптов см. Картирование --размеров РНК-транскриптов

79—81, 95—96, 101, 124—125,

142, 144, 270

--сайтов инициации 60—61, 79,

81, 83-84, 94—101, 144—147,

173—180. См. Картирование

— прерванная 94—99

— регуляторные последовательности

52

--факторы 87, 157

— сайты терминации 85

— системы см. Бесклеточные про-

кариотические системы, Транс-фекция, Хроматин, Экспрессия генов in vivo, Ядра

— скорость элонгации 96, 125—127,

147—149

Транскрипция—трансляция в ооцитах Xenopus 86—87

-- достоинства и недостатки системы in vitro-250, 251—252

390

Предметный указатель

--сравнение систем in vitro с системами in vivo 251

--у прокариот 216—252. См. также Бесклеточные прокариотиче-ские системы

Трансляция эукариотической мРНК в бесклеточных фракционированных системах 299

----лизате ретикулоцитов,

включение аминокислот 283—285, 287

— —----достоинства и недостатки системы 288—290

------ обработка микрококковой нуклеазой 285—287

------оптимизация бе-

локсинтезирующей активности

280— 281

--- — — — приготовление и

хранение лизата 277—280

-----— регуляция, ингибиторы белкового синтеза 318— 320

----—--механизм действия ингибиторов 318—320

------- образование

комплексов инициации 314—318

------ трансляция экзогенных мРНК 281—283, 287— 288, 301—302

----¦---эндогенных

мРНК 281, 287, 302

----- — условия инкубации

281— 285, 287—288 ---- ооцитах Xenopus см.

Матричная РНК (мРНК), микроинъекции в ооциты Xenopus

¦---- - экстрактах зародышей

пшеницы, обработка микрококковой нуклеазой 293

---¦----преимущества

и недостатки системы 293—294

------- приготовление

и хранение экстрактов 290—291

------- условия инкубации 291—293

-----культур клеток, достоинства и недостатки системы 299—301

------- обработка микрококковой нуклеазой 299

---¦----оптимизация

условий инкубации 297—298

-------предынкубация

клеточных экстрактов 296

------- приготовление

экстрактов 295—296

-------и тканей, образование комплексов инициации 320—322

—--продукты трансляции, анализ с помощью электрофореза в ПААГ—ДСН 302—303

------ триптических пептидов 305—308

----— биологическая активность в бесклеточных экстрактах 308

--------ооцитах Xenopus 331

-----включение аминокислот 301—302

--¦---иммунопреципитация

303, 305

— — ¦---расшифровка амино-

кислотных последовательностей 308

---процессинг, протеолиз первичных продуктов 313—314

----сигнальные последовательности см. Сигнальные последовательности

Транспортные РНК (тРНК), использование 1Ч-формил-Р55]-метио-нил-TPHKf для изучения процессинга продуктов трансляции 313, 316

— — получение [35S]-Met-TPHK

315—316. См. также Процессинг посттранскрипционный Трансфекция клеток млекопитающих, векторы на основе вирусов 43— 48

Предметный указатель

391

---выбор метода переноса генов 32—33

—--ДЭАЭ-декстрановый метод

24—26

---индуцибельные гены 55—61

-- — использование электростимуляции 32

---кальцийфосфатная методика

см. Кальцийфосфатная методика трансфекции клеток млекопитающих

---липосомы как переносчики

генов 29—31 --- метод отбора колоний на

метоцеле 15 ---микроинъекция ДНК см.

ДНК

---перенос генов с помощью

хромосом 32 ---последовательности ДНК,

регулирующие транскрипцию

52—55

--— селектируемые маркеры,

аминогликозид —¦ фосфотрансфе-

раза (???) 38 -----гипоксантин-гуанин—

фосфорибозилтрансфераза

(HGPRT) 38 -----дигидрофолатредук-

таза (DHFR) 41—42 — —---· — доминантные трансформирующие гены 42—43 ----·— ксантин-гуанин—

фосфорибозилтрансфераза

(XGPRT) 40—41

-----онкогены 43

-------тимидинкиназа 33—34

-----хлорамфеникол-

ацетилтрансфераза (CAT) 39—40 --- слияние протопластов с

эукариотическими клетками в

культуре 31 ---стабильная трансформация

50—52

---упаковка in vitro ДНК вирусов эукариот 32

---фаза временной экспрессии

перенесенных генов 48—50

---экспрессия генов, чувствительных к глюкокортикоидам 57

----глобиновых генов 59—

61

----металлотионеиновых генов 56—57

----гй-гена HSV 48—55

Трансформация см. Трансфекция

Трикаин (MS 222) 333. См. также Этил-ж-аминобензоат

«Триптиказный» агар 189

Трихлоруксусная кислота (ТХУ), применение при изучении синтеза белков 225—228, 284—285

----- транскрипции 120—

121

Фаг, использование в системе мини-клеток 208

— — — —¦ УФ-облученных клеток-

хозяев 186—187, 192

— — при трансфекции клеток мле-

копитающих 18

— концентрирование препаратов

194

•— осаждение в полиэтиленгликоле (ПЭГ) 194. 195

— получение 193—195

— титрование 193, 194

Фенол, использование при выделении РНК 123, 257—260

— перегонка 256—257 Флюорография геля 197, 198

Хлорамфеникол-ацетилтрансфераза (CAT) 39—40, 234—236

Хроматин, анализ специфических РНК-транскриптов гибридизацией с ДНК-зондами 169—173

---- картирование с помощью нуклеазы S1 173—180

— выделение гистонов методом соле-

вой экстракции 181

392

Предметный указатель

¦----хроматографии на гидр-

оксиапатите 181

-- негистоновых белков методом

дифференциального экстрагирования 181

•-----хроматографии на

гидроксиапатите 181

--РНК-полимеразы Е. coli 162—

165

— обоснованность применения РНК-

полимеразы Е. coli 164, 180— 181

— принципы методов выделения

160—161

— проблемы, связанные с наличием

эндогенной РНК 165—167

— реконструкция 182—184

— сохранение эндогенной РНК-по-

лимеразной активности 118

— транскрипция ДНК-зависимая

РНК-полимеразой Е. coli 167— 169

--РНК-зависимая РНК-полимеразой Е. coli 180

— — эндогенной РНК-полимеразой

118—121

— фракционирование 181—182

Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы гомогенизированных ооцитов 350—352 -----комплексов инициации трансляции 321—322

—----метод «подушки» 352

'-------«ступенчатый» 352

<-----микросомных мембран 310

¦-----мини-клеток 201—

204

-----РНК 124, 270—271

— —--CsCl, метод самофор-

мирующегося градиента 194

Штаммы Е. coli с низкой РНКазной активностью или без нее 240

Экзонуклеаза V в клетках Е, coli 241—242

Экспрессия генов в бесклеточных прокариотических системах транскрипции—трансляции 240

--in vivo в прокариотических

системах, соответствие между генами и их продуктами 213— 214

—-------макси-клеток,

введение радиоактивной метки в кодируемые плазмидой белки 209, 212

--------возможные

проблемы 212—213

-----·----выбор бактериального штамма 208—210

— —----. _ _ подходящие

плазмиды 210

-------- — получение

макси-клеток 210—211

--------принцип метода 186, 208

-----·---сравнение с

другими системами in vivo и in vitro 187

-------мини-клеток,

введение радиоактивной метки 205

---¦-----возможные

проблемы 206—207

—--------заражение

мини-клеток бактериофагами 208

--·------подходящие

плазмиды 200

-------- полипептиды — предшественники белков 207—208

-------- получение и

очистка мини-клеток 201—204

--------принцип метода 186, 199—200

-------- сравнение с

другими системами in vivo и in vitro 187

Предметный указатель

393

--------трансформация хозяина — продуцента мини-клеток 200—202

---------фракционирование мини-клеток 207

--------штамм-хозяин Е. coli 410, 200

-------УФ-облученных

клеток-хозяев, введение радиоактивной метки в кодируемые фагом белки 195—197

--------- возможные проблемы 197—198

---------использование фагов с гибридным иммунитетом 199

---------концентрирование препаратов фага 194

--------- необходимые материалы и штаммы 192

---------получение фага 193—195

--------- принцип

метода 186, 190, 192

----------сравнение с другими системами in vivo и in vitro 187

— эукариотических генов в клетках Е. coli 249—250

----системах in vitro 250

Электрофорез в агарозном геле 55, 59, 79, 95—97, 101, 125, 270—271

--полиакриламидном геле в присутствии ДСН (ПААГ —ДСН) 197,209, 214, 227—229, 234, 238, 248, 301—303, 313, 353—354

Элонгация при транскрипции 96, 125—127, 147—149. См. также Транскрипция

Энуклеация ооцитов 356—358

Энхансеры 52—55

Этил-ж-аминобензоат 333. См. также Трикаин

Ядра, анализ суммарных РНК-продуктов 124—125

— выделение без использования де-

тергентов 117—118 --из клеток культуры ткани

112—115 ---целых тканей 115

— — и изучение первичных РНК-

транскриптов 149—151

¦--с помощью неводных методов

118

— защита от нуклеаз и протеаз при

выделении 115—117

— инициация синтеза РНК, исполь-

зование [7-32Р]-нуклеозидтрифос-

фатов 127—129 -----?-тионуклеозидтри-

фосфатов 130—131 ----— у-тионуклеозидтри-

фосфатов 128—130 ----кэпирование 131—136,

155—156

?— как система для изучения транскрипции, преимущества и недостатки 111—112

— количественная оценка специфиче-

ских РНК-транскриптов 138—142

— определение активности РНК-по-

лимераз 121—123

--концов РНК-транскриптов

144—147

--размеров РНК-транскриптов

124, 142—14