Ѕиологический каталог




“ранскрипци€ и трансл€ци€. ћетоды

јвтор Ѕ.’еймс, —.’иггинс

лков, определение включившейс€ радиоактивности 225Ч 229, 283Ч285

Ч –Ќ , количественное определение

121Ч123, 169Ч173 —плайсинг 68, 85, 105, 156

“имидинкиназа (“ ), определение активности 34

Ч отбор tt-трансформантов 12Ч16,

33Ч35

Ч тест на наличие м–Ќ  35, 37

Ч транскрипци€ гена 10Ч24 “ионуклеозидтрифосфаты, исследование –Ќ -транскриптов 126Ч131, 138, 150Ч151

“ранскрипци€ в бесклеточных экстрактах при участии –Ќ -полимеразы I 89Ч90, 108Ч109

.------- –Ќ -полимеразы II 89Ч99, 101Ч105

------–Ќ -полимеразы III 89Ч90, 109

-- ооцитах Xenopus при участии

–Ќ -полимеразы I 67Ч68, 84Ч 85

------–Ќ -полимеразы II 65Ч67, 77Ч85

--Ј трансфицированных клетках

при участии –Ќ -полимеразы II 10Ч61

--хроматине при участии –Ќ -полимеразы II 118, 161, 164

--€драх при участии –Ќ -полимеразы I 119, 121, 123

-----–Ќ -полимеразы II

119Ч123

Ч идентификаци€ –Ќ -полимераз

84Ч85, 97Ч98, 119, 121Ч123

Ч инициаци€ синтеза –Ќ  127Ч136

Ч количественное определение 37,

121Ч123, 138Ч142, 169Ч173

--Ч –Ќ -транскриптов 37, 121,

123, 138Ч142, 171Ч173

Ч определение концов –Ќ -транск-

риптов см.  артирование --размеров –Ќ -транскриптов

79Ч81, 95Ч96, 101, 124Ч125,

142, 144, 270

--сайтов инициации 60Ч61, 79,

81, 83-84, 94Ч101, 144Ч147,

173Ч180. —м.  артирование

Ч прерванна€ 94Ч99

Ч регул€торные последовательности

52

--факторы 87, 157

Ч сайты терминации 85

Ч системы см. Ѕесклеточные про-

кариотические системы, “ранс-фекци€, ’роматин, Ёкспресси€ генов in vivo, ядра

Ч скорость элонгации 96, 125Ч127,

147Ч149

“ранскрипци€Чтрансл€ци€ в ооцитах Xenopus 86Ч87

-- достоинства и недостатки системы in vitro-250, 251Ч252

390

ѕредметный указатель

--сравнение систем in vitro с системами in vivo 251

--у прокариот 216Ч252. —м. также Ѕесклеточные прокариотиче-ские системы

“рансл€ци€ эукариотической м–Ќ  в бесклеточных фракционированных системах 299

----лизате ретикулоцитов,

включение аминокислот 283Ч285, 287

Ч Ч----достоинства и недостатки системы 288Ч290

------ обработка микрококковой нуклеазой 285Ч287

------оптимизаци€ бе-

локсинтезирующей активности

280Ч 281

--- Ч Ч Ч приготовление и

хранение лизата 277Ч280

-----Ч регул€ци€, ингибиторы белкового синтеза 318Ч 320

----Ч--механизм действи€ ингибиторов 318Ч320

------- образование

комплексов инициации 314Ч318

------ трансл€ци€ экзогенных м–Ќ  281Ч283, 287Ч 288, 301Ч302

----¶---эндогенных

м–Ќ  281, 287, 302

----- Ч услови€ инкубации

281Ч 285, 287Ч288 ---- ооцитах Xenopus см.

ћатрична€ –Ќ  (м–Ќ ), микроинъекции в ооциты Xenopus

¶---- - экстрактах зародышей

пшеницы, обработка микрококковой нуклеазой 293

---¶----преимущества

и недостатки системы 293Ч294

------- приготовление

и хранение экстрактов 290Ч291

------- услови€ инкубации 291Ч293

-----культур клеток, достоинства и недостатки системы 299Ч301

------- обработка микрококковой нуклеазой 299

---¶----оптимизаци€

условий инкубации 297Ч298

-------предынкубаци€

клеточных экстрактов 296

------- приготовление

экстрактов 295Ч296

-------и тканей, образование комплексов инициации 320Ч322

Ч--продукты трансл€ции, анализ с помощью электрофореза в ѕјј√Чƒ—Ќ 302Ч303

------ триптических пептидов 305Ч308

----Ч биологическа€ активность в бесклеточных экстрактах 308

--------ооцитах Xenopus 331

-----включение аминокислот 301Ч302

--¶---иммунопреципитаци€

303, 305

Ч Ч ¶---расшифровка амино-

кислотных последовательностей 308

---процессинг, протеолиз первичных продуктов 313Ч314

----сигнальные последовательности см. —игнальные последовательности

“ранспортные –Ќ  (т–Ќ ), использование 1„-формил-–55]-метио-нил-TPHKf дл€ изучени€ процессинга продуктов трансл€ции 313, 316

Ч Ч получение [35S]-Met-TPHK

315Ч316. —м. также ѕроцессинг посттранскрипционный “рансфекци€ клеток млекопитающих, векторы на основе вирусов 43Ч 48

ѕредметный указатель

391

---выбор метода переноса генов 32Ч33

Ч--ƒЁјЁ-декстрановый метод

24Ч26

---индуцибельные гены 55Ч61

-- Ч использование электростимул€ции 32

---кальцийфосфатна€ методика

см.  альцийфосфатна€ методика трансфекции клеток млекопитающих

---липосомы как переносчики

генов 29Ч31 --- метод отбора колоний на

метоцеле 15 ---микроинъекци€ ƒЌ  см.

ƒЌ 

---перенос генов с помощью

хромосом 32 ---последовательности ƒЌ ,

регулирующие транскрипцию

52Ч55

--Ч селектируемые маркеры,

аминогликозид Ч¶ фосфотрансфе-

раза (???) 38 -----гипоксантин-гуанинЧ

фосфорибозилтрансфераза

(HGPRT) 38 -----дигидрофолатредук-

таза (DHFR) 41Ч42 Ч Ч---Ј Ч доминантные трансформирующие гены 42Ч43 ----ЈЧ ксантин-гуанинЧ

фосфорибозилтрансфераза

(XGPRT) 40Ч41

-----онкогены 43

-------тимидинкиназа 33Ч34

-----хлорамфеникол-

ацетилтрансфераза (CAT) 39Ч40 --- сли€ние протопластов с

эукариотическими клетками в

культуре 31 ---стабильна€ трансформаци€

50Ч52

---упаковка in vitro ƒЌ  вирусов эукариот 32

---фаза временной экспрессии

перенесенных генов 48Ч50

---экспресси€ генов, чувствительных к глюкокортикоидам 57

----глобиновых генов 59Ч

61

----металлотионеиновых генов 56Ч57

----гй-гена HSV 48Ч55

“рансформаци€ см. “рансфекци€

“рикаин (MS 222) 333. —м. также Ётил-ж-аминобензоат

Ђ“риптиказныйї агар 189

“рихлоруксусна€ кислота (“’”), применение при изучении синтеза белков 225Ч228, 284Ч285

----- транскрипции 120Ч

121

‘аг, использование в системе мини-клеток 208

Ч Ч Ч Ч¶ ”‘-облученных клеток-

хоз€ев 186Ч187, 192

Ч Ч при трансфекции клеток мле-

копитающих 18

Ч концентрирование препаратов

194

ХЧ осаждение в полиэтиленгликоле (ѕЁ√) 194. 195

Ч получение 193Ч195

Ч титрование 193, 194

‘енол, использование при выделении –Ќ  123, 257Ч260

Ч перегонка 256Ч257 ‘люорографи€ гел€ 197, 198

’лорамфеникол-ацетилтрансфераза (CAT) 39Ч40, 234Ч236

’роматин, анализ специфических –Ќ -транскриптов гибридизацией с ƒЌ -зондами 169Ч173

---- картирование с помощью нуклеазы S1 173Ч180

Ч выделение гистонов методом соле-

вой экстракции 181

392

ѕредметный указатель

¶----хроматографии на гидр-

оксиапатите 181

-- негистоновых белков методом

дифференциального экстрагировани€ 181

Х-----хроматографии на

гидроксиапатите 181

--–Ќ -полимеразы ≈. coli 162Ч

165

Ч обоснованность применени€ –Ќ -

полимеразы ≈. coli 164, 180Ч 181

Ч принципы методов выделени€

160Ч161

Ч проблемы, св€занные с наличием

эндогенной –Ќ  165Ч167

Ч реконструкци€ 182Ч184

Ч сохранение эндогенной –Ќ -по-

лимеразной активности 118

Ч транскрипци€ ƒЌ -зависима€

–Ќ -полимеразой ≈. coli 167Ч 169

--–Ќ -зависима€ –Ќ -полимеразой ≈. coli 180

Ч Ч эндогенной –Ќ -полимеразой

118Ч121

Ч фракционирование 181Ч182

÷ентрифугирование в градиенте плотности сахарозы гомогенизированных ооцитов 350Ч352 -----комплексов инициации трансл€ции 321Ч322

Ч----метод Ђподушкиї 352

'-------Ђступенчатыйї 352

<-----микросомных мембран 310

¶-----мини-клеток 201Ч

204

-----–Ќ  124, 270Ч271

Ч Ч--CsCl, метод самофор-

мирующегос€ градиента 194

Ўтаммы ≈. coli с низкой –Ќ азной активностью или без нее 240

Ёкзонуклеаза V в клетках ≈, coli 241Ч242

Ёкспресси€ генов в бесклеточных прокариотических системах транскрипцииЧтрансл€ции 240

--in vivo в прокариотических

системах, соответствие между генами и их продуктами 213Ч 214

Ч-------макси-клеток,

введение радиоактивной метки в кодируемые плазмидой белки 209, 212

--------возможные

проблемы 212Ч213

-----Ј----выбор бактериального штамма 208Ч210

Ч Ч----. _ _ подход€щие

плазмиды 210

-------- Ч получение

макси-клеток 210Ч211

--------принцип метода 186, 208

-----Ј---сравнение с

другими системами in vivo и in vitro 187

-------мини-клеток,

введение радиоактивной метки 205

---¶-----возможные

проблемы 206Ч207

Ч--------заражение

мини-клеток бактериофагами 208

--Ј------подход€щие

плазмиды 200

-------- полипептиды Ч предшественники белков 207Ч208

-------- получение и

очистка мини-клеток 201Ч204

--------принцип метода 186, 199Ч200

-------- сравнение с

другими системами in vivo и in vitro 187

ѕредметный указатель

393

--------трансформаци€ хоз€ина Ч продуцента мини-клеток 200Ч202

---------фракционирование мини-клеток 207

--------штамм-хоз€ин ≈. coli 410, 200

-------”‘-облученных

клеток-хоз€ев, введение радиоактивной метки в кодируемые фагом белки 195Ч197

--------- возможные проблемы 197Ч198

---------использование фагов с гибридным иммунитетом 199

---------концентрирование препаратов фага 194

--------- необходимые материалы и штаммы 192

---------получение фага 193Ч195

--------- принцип

метода 186, 190, 192

----------сравнение с другими системами in vivo и in vitro 187

Ч эукариотических генов в клетках ≈. coli 249Ч250

----системах in vitro 250

Ёлектрофорез в агарозном геле 55, 59, 79, 95Ч97, 101, 125, 270Ч271

--полиакриламидном геле в присутствии ƒ—Ќ (ѕјј√ Чƒ—Ќ) 197,209, 214, 227Ч229, 234, 238, 248, 301Ч303, 313, 353Ч354

Ёлонгаци€ при транскрипции 96, 125Ч127, 147Ч149. —м. также “ранскрипци€

Ёнуклеаци€ ооцитов 356Ч358

Ёнхансеры 52Ч55

Ётил-ж-аминобензоат 333. —м. также “рикаин

ядра, анализ суммарных –Ќ -продуктов 124Ч125

Ч выделение без использовани€ де-

тергентов 117Ч118 --из клеток культуры ткани

112Ч115 ---целых тканей 115

Ч Ч и изучение первичных –Ќ -

транскриптов 149Ч151

¶--с помощью неводных методов

118

Ч защита от нуклеаз и протеаз при

выделении 115Ч117

Ч инициаци€ синтеза –Ќ , исполь-

зование [7-32–]-нуклеозидтрифос-

фатов 127Ч129 -----?-тионуклеозидтри-

фосфатов 130Ч131 ----Ч у-тионуклеозидтри-

фосфатов 128Ч130 ----кэпирование 131Ч136,

155Ч156

?Ч как система дл€ изучени€ транскрипции, преимущества и недостатки 111Ч112

Ч количественна€ оценка специфиче-

ских –Ќ -транскриптов 138Ч142

Ч определение активности –Ќ -по-

лимераз 121Ч123

--концов –Ќ -транскриптов

144Ч147

--размеров –Ќ -транскриптов

124, 142Ч14

страница 86
<   —ѕ»— ”  Ќ»√ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88

—качать книгу "“ранскрипци€ и трансл€ци€. ћетоды" (6.57Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объ€влений]  [обратна€ св€зь]

пїњ
Rambler's Top100 ’имический каталог

Copyright © 2009
(18.10.2019)