впервые получены строгие доказательства объективности данных цитохимического определения содержания катионных белков и пептидов нейтрофилов при использовании лизосомально-катионного теста.

Биологическая значимость антибиотических пептидов и белков однозначно просматривается в анализе явления резорбтивной клеточной резистентности (Пигаревский, 1978, 1992).

Гипотеза о резорбтивной клеточной резистентности как особой форме антимикробной защиты организма человека и животных была выдвинута проф. В. Е. Пигаревский (1978) на основании результатов работ по исследованию морфодинамики воспалительных очагов повреждения при инфекционной патологии. Морфологический анализ инфицированных органов и тканей при хламидиальной (Пигаревский, Толыбеков, 1976) и псевдотуберкулезной (Мазинг, Юнусова, Таблица 2

Показателя содержания катионных белков в нейтрофилах человека

Исследуемый показатель Источник кейтрофилов кровь пупоанннал кровь донорская

лкт 1.15±0.03 1.58±0.02

ОКБ, мг/109 клеток 16 39

Миелопероксидаза, мг/109 клеток 0.273 1.05

Эластаза, %/109 клеток 21 100

Катепсин G, %/109 клеток 25 100

Примечание. Здесь и в табл. 3, 4 ЛКТ — лизосомально-катионный тест. ОКБ — общий кислоторастворимый белок.

Таблица 3

Показатели содержания катионных белков в нейтрофилах крыс

Исследуемый показатель Возраст животных 12—18 4 10 дней 20 дней 30 дней 45 дней 8—10 мес

ЛКТ ОКБ, мг/109 клеток Миелопероксидаза, мг/109 клеток 0.71 ±0.05 30 0.3 1.08±0.01 33 0.33 1.07±0.04 36 0.4 1.09±0.03 41 1.9 1.1210.02 56 2.0 1.3110.02 79 2.51

Таблица 4

Показатели содержания катионных белков и функциональной активности

нейтрофилов кролика

Исследуемый показатель Возраст животных, дни 7 14 21 28 60

ОКБ, мг/109 клеток 15 22 30 62 65

Миелопероксидаза, мг/109 0.098 0.192 0.210 0.417 0.565

клеток

Эластаза, %/109 клеток 46 68 71 83 100

Фагоцитарное число, % 76 69 62 61 70

Фагоцитарный индекс, чис- 5.2 3.8 3.4 3.8 6

ло микробов в клетке

ААКБ 30 26 38 52 75

Примечание. ААКБ — антибактериальная активность катионных белков. 1982) инфекциях показал, что макрофаги воспалительных очагов в процессе своей жизнедеятельности проходят стадию поглощения продуктов распада нейтрофилов (ядер, хроматина, гранул и их отдельных белково-пептидных компонентов), благодаря чему они становятся резистентными к микробному паразитированию. Опыты по инактивации этих возбудителей in vitro ядерными гистонами (Пигаревский и др., 1975) и гранулярными катионными белками нейтрофилов (Кокряков и др., 1977) частично свидетельствовали в пользу выдвинутой концепции.

С целью дальнейшего обоснования биологической значимости рассматриваемого явления и расшифровки его конкретных морфо-биохимических механизмов нами было проведено комплексное исследование с использованием в качестве основного объекта изучения перитонеальных макрофагов кролика, выделенных из очага асептического воспаления на разных сроках после его индукции. Такое воспаление характеризуется надежно воспроизводимой во времени динамикой смены лейкоцитарных популяций. В первые 4—8 ч после введения в брюшную полость индуцирующего раствора крахмала наблюдается интенсивный выход туда нейтрофилов из крови. До 36 ч этот тип клеток является преобладающим в эксудате. В дальнейшем происходит закономерная смена клеточных популяций в очаге воспаления и к 48 ч макрофаги составляют уже не менее 90 % клеток эксудата, причем около 50 % из них содержат морфологически идентифицируемые остатки ядер и гранул нейтрофилов. В последующие 3 сут наблюдается постепенное исчезновение компонентов нейтрофилов из макрофагов в результате их переваривания в гранулярном аппарате последних. Подобная динамика клеточных реакций в очаге воспаления позволяет получать макрофаги с различным содержанием резорбированных антимикробных белков нейтрофилов (миелопероксидаза, лактоферрин, дефенсины и др.) и использовать их в витральных тест-системах (Мазинг, Данилова, 1989).

В первой серии экспериментов изучали соотношение функциональной активности (фагоцитарное число и индекс, дыхательный взрыв) и количества миелопероксидазы гранулоцитарного происхождения в перитонеальных макрофагах кролика, выделенных из организма на разных сроках развертывания асептического воспаления (табл. 5). Установлена четкая положительная коррелятивная связь между показателями функциональной активности макрофагов и содержанием в них миелопероксидазы, которое максимально в 2-суточ-ных клетках. Можно допустить, что именно с увеличением количества антимикробных белков нейтрофилов в вакуолярном аппарате макрофагов связано повышение их цитоцидного потенциала по сравнению с исходными интактными клетками. Подобный эффект наблюдали зарубежные исследователи (Locksley, Klebanoff, 1983) при добавлении миелопероксидазы в инкубационную среду культуры макрофагов с фагоцитированными простейшими. Такой подход к анализу процесса резорбтивной клеточной резистентности позволяет более Таблица 5

Показатели функциональной активности н содержали антимикробных белков

макрофагов

Объект исследожанил Содержание мне-лоперожхвдазы, мг/10* клеток Фагооитяривж активность клеток а отношении Staphylococcus epidermidis Процент НСТ-позитивных клеток

ФЧ. % ФИ Нейтрофилы 0.565 _ — -

Перитонеальные

макрофаги:

резидентные 0.03 25.0±1.3 3.210.11 10.0Ю.8

2-суточные 0.28 49.011.0* 4.1Ю.12*** 31.011.1*

3-суточные 0.231 34.0±1.1** 4.0±0.09*** 24.011.2*

4-суточные 0.15 30.0±1.2*** 3.210.11 19.0±1.3**

5- суточные 0.05 28.0±1.3 2.3±0.15 14.011.1***

Примечание. Здесь и в табл. 6 ФЧ — фагоцитарное число (процент фагоцитов, участвующих в фагоцитарном процессе, от общего числа клеток). ФИ — фагоцитарный индекс (число фа