Биологический каталог




Механизмы внутриклеточной сигнализации

Автор З.И.Крутецкая, О.Е.Лебедев, Л.С.Курилова

ne, 1982; Chang et al., 1987; Glaser et al., 1990; Hazlett et al., 1990; Крутецкая, Лебедев, 1993). 4-бромфенацилбромид необратимо модифицирует (алкилирует) остаток His-48, входящий в состав активного центра фермента.

В последние годы новая форма секреторных фосфолипаз А2 идентифицирована в тканях человека (Chen et al., 1994а), крысы (Chen et al., 1994b) и макрофагоподобных клетках мыши линии P388D, (Balboa et al., 1996). Эти фосфолипазы А2 объединяют в V группу. Эти секреторные фосфолипазы А2 имеют мол. массу 14 кДа, 6 дисульфидных связей, 118 аминокислот, активируются Са2+ в миллимолярных концентрациях (Dennis, 1997).

В макрофагоподобных клетках мыши линии P388D,, являющихся моделью перитонеальных макрофагов (Glaser et al., 1990), обнаружена цитоплазматическая Са2+-независимая фосфолипаза А2 с большой мол. массой (80-85 кДа), не содержащая дисульфидных связей, способная образовывать олигомеры с мол. массой 337 кДа (Ackermarm et al., 1994, 1995). Эти фосфолипазы А2 относят к IV группе (Dennis, 1997).

Таким образом, с каждым годом идентифицируются все новые фосфолипазы А2, играющие важную роль в процессах внутриклеточной сигнализации, освобождении АК и синтезе эйкозаноидов. Во многих случаях, в одной и той же клетке присутствует несколько форм фосфолипаз А2. Так, в макрофагоподобных клетках линии P388D,, обнаружены фосфолипазы А2, относящиеся ко II и IV группам, а также Са2+ -независимые фосфолипазы А2 VI группы (Barbour, Dennis, 1993).

АК, освобожденная из мембранных липидов под действием фосфолипазы А2, легко окисляется с образованием биологически активных соединений эйкозаноидов.

Эйкозаноиды являются важными медиаторами во многих физиологических и патофизиологических процессах. Количество и специфичность синтезируемых простагландинов или лейкотриенов зависит не только от оснащенности клетки ферментами, окисляющими АК до соответствующих метаболитов, но и, более того, от типа используемого стимула. По сравнению с другими клетками, макрофаги являются наиболее активными производителями всего спектра эйкозаноидов. Они способны синтезировать и секретировать метаболиты АК в ответ на многие физиологические стимулы, такие как факторы, вызывающие фагоцитоз, иммунные комплексы, факторы комплемента, липополисахариды, эндотоксин (Scott et al., 1980, 1982; Hamilton, Adams, 1987; Kaever et al., 1990) и таким образом непосредственно участвуют в воспалительных и аллергических реакциях.

В перитонеальных макрофагах АК, освобождаемая из мембранных фосфолипидов под действием фосфолипазы А2 легко окисляется по циклооксигеназному и липоксигеназному путям (Scott et al., 1982; Tripp et al, 1985a, 1985b).

Резидентные перитонеальные макрофаги мыши освобождают большие количества свободной АК при стимуляции зимозаном, конканавалином А, кальциевым ионофором А 23187, или активатором ПКС форболовым эфиром РМА (Balsinde et al., 1990). По эффективности стимуляции освобождения АК агенты выстраиваются в следующий ряд: А 23187 » зимозан > конканавалин А > РМА. Показано, что предварительная инкубация макрофагов в течение 10 мин с РМА существенно потенциирует освобождение АК при действии других аюнистов.

Культивируемые резидентные макрофаги крысы продуцируют небольшие количества свободной АК и простагландина Е2 (Peters-Golden et al, 1990). При стимуляции перитонеальных макрофагов в течение 30 мин активатором ПКС форболовым эфиром РМА (50 нМ) происходит существенное возрастание продукции свободной АК, продуктов ее окисления по циклооксигеназному пути 6-кетопростагландина Fia, тромбоксана В2, простагландина Е2, простагландина D2, а также продукта 12-литюксигеназного пути окисления АК 12-гидроксиэйкозатетраеновой кислоты. Способность РМА запускать метаболизм АК в перитонеальных макрофагах коррелирует с его возможностью активировать ПКС. В пользу этого свидетельствуют следующие данные. Так, показано, что другой активатор ПКС, проникающий через мембрану аналог DAG 50 мкМ олеоил ацетилглицерин также активирует метаболизм АК в перитонеальных макрофагах. В то же время, форбол дидеканоат, не способный активировать ПКС, не влияет на метаболизм АК в макрофагах. Более того, два структурно различных ингибитора ПКС стауроспорин и сфинганин предотвращают вызываемое РМА освобождение АК в перитонеальных макрофагах. В то же время, инкубация с РМА альвеолярных макрофагов крысы не приводит к образованию эйкозаноидов, а сопровождается только продукцией незначительного количества свободной АК (Peters-Golden et al., 1990).

Обнаружено также, что активация ПКС запускает освобождение и метаболизм АК в различных популяциях макрофагов, включая моноциты периферической крови человека (Kozumbo et al., 1987), резидентные перитонеальные макрофаги мыши (Humes et al., 1982; Wey, Baxter, 1986; Pfannkuche et al., 1989), клетки Купфера (Dieter et al., 1989; Kuiper et al., 1989) и макрофагоподобные клетки линии RAW 204.7 (Burch, 1987). Практически во всех указанных популяциях макрофагов, также как и в перитонеальных макрофагах крысы (Peters-Golden et al., 1990), освобождающаяся при активации ПКС АК окисляется преимущественно по циклооксигеназному, а не по 5-липоксигеназному путям (Humes et al., 1982; Wey, Baxter, 1986; Kozumbo et al., 1987). Так, в макрофагах печени крысы, обработанных РМА, АК окисляется до простагландина Е2, простагландина D2 и тромбоксана В2 (Dieter, Fitzke, 1993).

В резидентных перитонеальных макрофагах .мыши и макрофагоподобных клетках линии НА 38, активаторы ПКС форболовый эфир ТРА и синтетические аналоги DAG диоктаноилглицерин и олеоилацетилглицерин стимулируют освобождение АК и продукцию простагландина Е2, но не лейкотриена С4 (Kaever et al., 1990). Увеличение внутриклеточной концентрации Са*+ путем добавления Са2*-ионофоров одновременно с активаторами ПКС приводит не только к образованию простагландина Е2, но и к активации 5-липоксигеназного пути окисления АК и продукции лейкотриена С4. Ингибиторы ПКС сфингозин, тамоксифен, стауроспорин полностью устраняют эффекты ТРА (Kaever et al

страница 16
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77

Скачать книгу "Механизмы внутриклеточной сигнализации" (3.04Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(20.11.2019)