93). Остаток тирозина (Tyr-960) в цитоплазматическом домене рецептора, ближайшем к трансмембранному сегменту, является важным для опосредования биологической активности инсулина (White et al., 1988; Ullrich, Schlessinger, 1990). В результате аутофосфорилирования рецепторов с собственной тирозинкиназной активностью создаются условия для фосфорилирования по остаткам тирозина эндогенных субстратов, образуются участки для связывания белков, содержащих SH2-и вНз-домены (Cadena, Gill, 1992). Аутофосфорилированный инсулиновый рецептор фосфорилирует по остаткам тирозина такие эндогенные субстраты, как субстрат инсулинового рецептора-1 (insulin receptor substrate, IRS-1); белок She, содержащий SH2-домен; различные

белки с мол. массой 60 кДа, один из которых тесно связан с GAP-белком Ras-белка (White, Kahn, 1994; Danielsen et al, 1995; White, 1996).

Инсулин

Рис. 17. Структура рецептора инсулина.

а, р - субъединицы рецептора.

И - участки, богатые цистеином.

I

- тирозинкиназный домен.

- С-терминальный регуляторный участок.

«о

. IRS-1 является ключевой сигнальной молекулой для инсулинового рецептора. IRS-1 представляет собой белок с мол. массой 185 кДа и содержит более 10 потенциальных участков фосфорилирования по тирозину (White, 1996). Фосфорилированный IRS-1 связывается с белками, содержащими 8Н2-домен, такими как фосфатидилинозитол-3-киназа; тирозинфосфатаза SH-PTP2 или PTP1D; белок Grb2; белок Nek (White, Kahn, 1994; Danielsen et al., 1995; Malarkey et al., 1995; White,

1996) .

В последнее время появились данные о том, что рецептор инсулина может взаимодействовать с гетеротримерными G,- и Gs-белками. В тирозинкиназном домене рецептора инсулина идентифицирован фрагмент (аминокислоты 1135-1156), с которым связываются G-белки. Этот фрагмент содержит 3 остатка тирозина, которые подвергаются аутофосфорилированию. На адипоцитах крысы обнаружено, что инсулин стимулирует связывание С,-белка (с мол. массой 41 кДа) с рецептором инсулина (Jo et al., 1993).

Кроме того, накапливается все больше данных о важной роли актиновых филаментов в распространении сигналов, запускаемых связыванием инсулина со своим рецептором в мембране (Tsakiridis et al.,

1997) .

Дефосфорилирование аутофосфорилированных рецепторов ростовых факторов белковыми тирозинфосфатазами является, по-видимому, основным механизмом отрицательной регуляции активности рецепторов с тирозинкиназной активностью (Tomic et al., 1995). Наиболее возможными кандидатами для физического взаимодействия с аутофосфорилированными рецепторами ростовых факторов являются тирозинфосфатазы, имеющие 8Н2-домен. Идентифицированы две фосфотирозинфосфатазы, имеющие SH2-домен: РТР 1С (SH-PTP1) и PTP1D (SH-PTP2). В опытах in vitro показано, что тирозинфосфатаза PTP1D взаимодействует с инсулиновым рецептором и IRS-1. Связывание рецептора с PTP1D приводит к тирозиновому фосфорилированию фосфатазы и активации ее тирозинфосфатазной активности (Vogel et al., 1993). Установлено также, что совместная экспрессия фосфатазы РТР1С с инсулиновым рецептором или рецептором инсулиноподобного фактора роста-1 приводит к их полному или частичному дефосфорилированию (Vogel et al., 1993). Кроме того, обнаружено, что тирозинфосфатаза РТР1В, не содержащая 5Н2-домена, также подавляет активность инсулинового рецептора (Fischer et al., 1991).

Рецептор фактора роста тромбоцитов. (ФРТ) относится к семейству рецепторных тирозинкиназ; для него характерно наличие пяти иммуноглобулиноподобных доменов во внеклеточной области и дополнительного регуляторного участка в тирозинкиназном домене (рис. 18). Рецептор ФРГ

Рис. 18. Структура рецептора для фактора роста тромбоцитов (ФРГ), относящегося к реценторным тирозиикиназам.

Фосфорилированный рецептор ФРТ может взаимодействовать со следующими белками-мишенями: src-цитоплазматическими тирозинкиназами семейства sre; ФЛСу -фосфолипазой Су ; р85 -субъединицей 85 кДа фосфатидилинозитол-3-киназы (ФИ-ЗК); GAP - ГТФаза-активирующим белком; Grb2 - белком 2, связывающимся с рецепторами ростовых факторов (growth-factor-receptor binding proteins); SHPTP-2 - фосфотирозинфосфатазой (no Malarkey et al., 1995).

«2

Рецептор ФРТ содержит по меньшей мере 8 остатков тирозина, которые подвергаются аутофосфорилированию при активации рецептора. Эти участки аутофосфорилирования распределены по всему цитоплазматическому домену рецептора. Так, фосфорилирование Туг-579 и Туг-581 необходимо для связывания тирозинкиназ семейства Src, в то время как субъединица р85 фосфатидилинозитол-3-киназы взаимодействует с фосфорилированными остатками Туг-740 и Туг-751 в киназном вставочном домене. Туг-751 служит также связывающим участком для белка Nek. GAP-белок Ras белка взаимодействует с Туг-771, тирозинфосфатаза PTP1D (SH-PTP-2) связывается с Туг-1009, а ФЛСу связывается с Туг-1021. Белок Grb2 взаимодействует с фосфорилированным остатком тирозина на молекуле тирозинфосфатазы SH-PTP-2. Кроме того, белок Grb2 может прямо связываться с фосфорилированным Туг-716 в киназном вставочном домене (Pawson, 1994; Schlessinger, 1994; Malarkey et al., 1995).

К семейству рецепторов ФРТ относится рецептор фактора стимуляции колоний (CSF-1, colony-stimulating factor 1), который обычно экспрессирован в макрофагах и фибробластах (Hunter, 1996). Основными участками аутофосфорилирования являются Туг-697, Туг-706 и Туг-721, локализованные в киназном вставочном домене рецептора. Фосфорилированный остаток Туг-721 связывается с регуляторной субъединицей р85 фосфатидилинозитол-3-киназы, а Туг-697 взаимодействует с белком Grb2. Обнаружено, что активированный рецептор CSF-1 взаимодействует также с тирозинкиназами семейства Src, что приводит к их активации (Courtneidge et al., 1993; Erpel, Courtneidge, 1995; Hunter, 1996). Тирозинкиназы семейства Src взаимодействуют в основном с фосфорилированным остатком Туг-561, расположенным в ближайшем к мембране домене рецептора CSF-1 (Alonso et al., 1995; Erpel, Courtneidge, 1995).

4.4.2. Нерецепторные