ГЭТЕ [228]. Образование лейкотриена С (ЛТ-С, LT-C) продемонстрировано как функциональным, так и хроматографическим анализом [227]. Несмотря даже на то, что в перитонеальных тучных клетках крысы ЛТ-С синтезируется в значительных количествах в ответ на обработку их ионофором А23187, высвобождение ЛТ-С, стимулированное антигеном, наблюдать регулярно не удается. Недавно, впрочем, оно было убедительно продемонстрировано на тучных клетках человека [267]. Эти клетки, а также базофилы крови кроликов и человека продуцируют также фактор активации тромбоцитов (ФАТ, PAF).

27.4.2. Гранулы тучных клеток

Гранулы базофилов и тучных клеток можно выделить из обработанных ультразвуком или гомогенизированных клеток центрифугированием в градиенте плотности. При использовании этого метода в гранулах сохраняются пери-гранулярные мембраны и мало изменяется исходное содержание гистамина [187, 194], который, возможно, связывается в гранулах с карбоксильными группами белков [194]. Кроме гистамина в гранулах тучных клеток содержится много гепарина, АТР, протеолитических ферментов, множество других ферментов, а также факторы хемотаксиса нейтрофилов и эозинофилов, описанные в предыдущих разделах. Среди факторов хемотаксиса идентифицированы два эозино-фильных тетрапептида и некоторые, более крупные молекулы (может быть, олигопептиды), обладающие сходной активностью. Тучные клетки и базофилы продуцируют также и фактор хемотаксиса нейтрофилов, представляющий собой белок с мол. массой более 160 кДа [194, 268]. Данный фактор секретируется лейкоцитами крови и легких человека в процессе IgE-зависимой аллергической реакции, что, возможно, способствует локальному накоплению нейтрофилов, наблюдаемому обычно на ранних стадиях аллергических реакций. В аллергических реакциях, возможно, также участвуют и такие хемотаксические факторы, как ЛТ-В4 и хемотаксические тетрапептиды эозинофилов, обладающие примерно одинаковой активностью в отношении эозинофилов и нейтрофилов. Тучные клетки секретируют также полипептид с низкой молекулярной массой, идентич-

27. Медиаторы: высвобождение и функции ный вазоактивному полипептиду кишечника (ВПК, VIP) или сходный с ним [269]. Вполне возможно, что этот продукт причастен к повышению проницаемости сосудов при IgE-опосредованных реакциях. В тучных клетках животных некоторых видов обнаружены серотонин и дофамин, а в гранулах тучных клеток крыс и морских свинок — значительное количество цинка [194].

Базофилы и тучные клетки человека содержат трипсиноподобную эстеразу и сходную с трипсином активность. Основной нейтральной протеиназой тучных клеток легких человека является триптаза с мол. массой около 130 кДа [270]. У низших животных имеется протеиназа, сходная с химотрипсином по субстратной специфичности [194]. В базофилах и тучных клетках содержатся некоторые классические ферменты лизосом, но их количество и разнообразие меньше, чем в нейтрофилах. Хотя имеющиеся данные можно интерпретировать и иначе, часто создается впечатление, что стимулированные базофилы высвобождают содержимое гранул постепенно, небольшими порциями, причем в процессе секреции принимает участие лишь небольшая часть мембран гранул и полного слияния плазматической мембраны клеток и мембраны гранул не происходит [191, 194, 271]. В течение еще 24 час или дольше можно наблюдать большие полости, содержащие остаточный материал гранул, который в конце концов растворяется. При этом, хотя полость гранул свободно сообщается с окружающей средой, химотрипсиноподобный фермент, характерный для базофильных гранул экспериментальных животных, может оставаться в течение многих часов связанным со стенками гранул. Это позволяет базофилам сохранять существенную ферментативную активность в отношении локальных субстратов в течение еще длительного времени после окончания реакции чувствительности немедленного типа.

И тучные клетки, и базофилы продуцируют пероксидазу, супероксид и пероксид водорода, что свидетельствует о возможных цитоцидных эффектах, аналогичных эффектам нейтрофилов [187]. Пероксидаза тучных клеток может также принимать участие в инактивации МРВ, подобно тому, как это происходит в эозинофилах [180].

В ответ на ряд иммунологических и неиммунологических стимулов тучные клетки крыс, лейкоциты человека и фрагменты легких человека и морских свинок секретируют протеолитический фермент, превращающий очищенный и неочищенный препараты кининогена в кинин. Этот фермент, выделяющийся из лейкоцитов (главным образом, по-видимому, из базофилов), стимулирован ных антигеном, получен в очищенном виде [272, 2731. Наиболее активная фракция имела мол. массу 1000—2000 кДа, причем ее активность в отношении кининогена плазмы человека была не ниже, чем у калликреина. Кроме того, имелись активные фракции с мол. массой 400 и 180 кДа. Фермент типа калликреина особенно активен в отношении эфиров тозил-Ь-аргинина; он действует на кини-ноген плазмы, хотя не исключено, что кининогены тканей являются не худшими, если не лучшими субстратами.

Высвобождающиеся из тучных клеток гранулы активно поглощаются макрофагами, нейтрофилами и эозинофилами, и, следовательно, они сами и их продукты могут играть какую-то, пока еще не совсем понятную роль в различных процессах, следующих за интернализацией этих клеток [173]. Препараты гранул тучных клеток, по-видимому, не содержащие таких растворимых медиаторов, как гистамин, вызывают подострые воспалительные реакции в коже; очевидно, в них содержатся другие медленно секретирующиеся молекулы, непосредственно участвующие в воспалении [187, 274, 275]. К таким молекулам относится недавно описанный олигопептид, связанный с гранулами; мол. масса этого олигопептида составляет 1400 [154]. Существованием этих и других Ч. В. Паркер

продуктов тучных клеток могут частично объясняться замедленные кожные и бронхиальные реакции при иммунологической и иеиммунологической стимуляции секреции в тучных клетках.

27.4.3. Тромбоциты

Тромбоциты — это не размножающиеся клетки, циркулирующие в кровяном русле и участвующие в свертывании крови; они происходят из мегакариоци-тов костного мозга. Формально тромбоциты не входят в иммунную систему, однако при иммунных реакциях они могут активироваться. Активированные тромбоциты секретируют факторы роста и свертывания, вазоактивные амины и липиды, нейтральные и кислые гидролазы; каждое из этих соединений может участвовать в воспалении [276, 277]. Активированные тромбоциты агрегируют; с образующимися при этом агрегатами могут связывать отвечающие лейкоциты, вызывая в результате закупорку сосудов.

27.5. Медиаторы

Современные представления о роли медиаторов в реакции гиперчувствительности основаны на ряде экспериментальных подходов: а) прямом определении медиаторов и их метаболитов в тканях, крови, серозной жидкости, моче и секрете дыхательных путей в процессе или по окончании реакции гиперчувствительности in vivo; это позволило выявить секрецию медиаторов, образование или исчезновение их de novo, а также морфологически обнаружить дегрануля-цию клеток; б) исследовании in vitro типа и количества медиаторов, секретируемых клетками, тканями и линиями культивируемых клеток, а также исследовании людей или животных с заболеваниями, затрагивающими клетки, продуцирующие медиаторы (мастоцитоз человека, базофильный лейкоз); в) изучении спектра медиаторов, их эффективности, продолжительности фармакологического воздействия и чувствительности к фармакологическому ингибированию в опытах с использованием очищенных медиаторов или смеси медиаторов на клетках, сосудах или препаратах гладких мышц; г) патологоанатомическом или физиологическом изучении тканей in vivo после введения (путем инъекции, ингаляции или per os) отдельных медиаторов; использовании таких систем для выявления потенциальной активности антагонистов медиаторов; д) определении in vivo при реакциях гиперчувствительности эффектов веществ, разрушающих данный медиатор (Н202 или каталаза), или избирательно блокирующих конечное их действие на тот или иной орган (антигистаминные препараты), т. е. выявлении снижения патологических или физиологических проявлений реакции гиперчувствительности; исследовании животных с врожденными и приобретенными нарушениями клеток, секретирующих медиаторы (животные с недостаточностью эозинофилов, которым введены антитела против эозинофилов; мыши линии W/W с недостаточностью тучных клеток), образования медиаторов (ингибиторы гистидин-декарбоксилазы); запасания медиаторов (резерпин), действия медиаторов (линии мышей, не чувствительных к гистамину); е) демонстрации тахифилаксии (избирательной способности клетки или ткани к пониженной восприимчивости к медиаторам) во время или сразу после окончания реакции гиперчувствительности in vivo.

Хотя эти исследования и помогли понять особенности функционирования большинства медиаторов, все же они имеют определенные границы, а в нашем понимании этой проблемы есть существенные пробелы. Во-первых, такие медиа-

27. Медиаторы: высвобождение и функции торы, как брадикинин, ФАТ или фактор С5а in vivo нестабильны, что снижает точность количественных исследований. Во-вторых, любые изменения, происходящие в крови и моче при аллергических реакциях, могут быть плохо заметными из-за того, что медиаторы типа гистамина образуются в организме повсеместно и создают высокий фон. В-третьих, инъекция медиатора животному или введение его в виде аэрозоля не обеспечивают их доставки в те участки тела, где они высвобождаются при аллергической реакции in vivo. В-четвертых, нет такого ингибитора, который действовал бы полностью и был бы абсолютно специфичен. Более того, гетерогенность рецепторов медиаторов, например существование Н,- и Н2-рецепторов для гистамина и наличие множества мишеней для действия медиаторов, в ряде случаев активирующихся одновременно (и опять-таки в качестве примера можно привести гистамин), затрудняет интерпретацию полученных данных. В-пятых, информация о локальных концентрациях медиаторов при реакции гиперчувствительности in vivo очень ограничена. В-шестых, существуют значительн