ток RBL-1 [364]. Это зависимый от кальция фермент с мол. массой мономера около 90 кДа. Мономерный белок совершенно неактивен, но в присутствии ионов Са2+ белок ди-меризуется и приобретает полную активность. Другие двувалентные ионы, такие как Mg2+ и Мп2+, не обладают таким действием, зависимостью фермента от Са2+ Ч. В. Паркер

может объясняться отсутствие активного фермента в нестимулированных клетках. Однако, поскольку фермент может активироваться фосфолипидами или ДАГ, существует еще и другой механизм активации. В стимулированных перитонеальных макрофагах или нейтрофилах, в противоположность культивируемым клеткам RBL-1 [363], можно наблюдать значительную активность 5-ЛО без добавления активирующих веществ in vitro [43, 155]. Возможно, это объясняется тем, что клетки уже были активированы in vivo.

27.5.7.4. Медленно реагирующие вещества

Медленно реагирующие вещества (МРВ) — семейство жирных кислот с 20 атомами углерода, имеющими в положении 5 гидроксигруппу, а в положении 6 — несколько боковых серусодержащих цепей (рис. 27.4). При их образовании из арахидоновой кислоты в положениях 7 (транс), 9(транс), \\(цис) и 14 имеются 4 двойных связи. МРВ могут образовываться не только из АК, но и из 5, 8, 11-эйкозатетраеновой и 5, 8, 14, 17-эйкозатетраеновой кислоты; в этих случаях появляются МРВ с тремя или пятью двойными связями соответственно. В обычных условиях in vivo (отсутствие специальной диеты) эти продукты образуются, по-видимому, в крайне низких концентрациях, что объясняется нехваткой соответствующих субстратов. Боковыми серусодержащими цепями могут быть глутатион, лейкотриен С (ЛТ-С4 при наличии четырех двойных связей), цистеинилглицин [ЛТ-D (ЛТ-Б4 при наличии четырех двойных связей)] или цистеин [ЛТ-Е (ЛТ-Е4 — при наличии четырех двойных связей)] [357]. МРВ были впервые описаны в 1938 г. При перфузии легких морской свинки ферментами из яда кобры в перфузатах была обнаружена активность, вызывающая характерное, медленно развивающееся сокращение изолированных гладких мышц,подвздошной кишки морской свинки [365]. Эта же активность была обнаружена в 1940 г. в легких сенсибилизированных морских свинок, перфузи-рованных антигеном [3661; позднее было показано, что данная активность высвобождается при аллергических реакциях, вызванных IgE-антителами. В результате исследований, проведенных на линии лейкозных базофилов крыс, содержащих IgE-рецепторы, в нашей лаборатории было показано, что МРВ — это метаболиты арахидоновой кислоты, образовавшиеся с помощью 5-ЛО [367— 369]. Позднее мы показали, что все виды МРВ имеют серусодержащую (боковую цепь) [370] и идентифицировали две из трех цепей как глутатион и цистеин [371—373]. Было также обнаружено, что МРВ, индуцированные иммунологическим и неиммунологическим путем, по своей структуре абсолютно идентичны [374]. Самуэльссон и сотрудники [375] показали, что атомы серы находятся в положении 6 и определили места двойных связей. Позднее они [376], а также группа Морриса [377] идентифицировали цистеинилглициновую форму молекулы МРВ, выявленного нами ранее. Окончательная структура и расположение двойных связей в молекулах МРВ были независимо установлены с помощью органического синтеза двумя группами — Хаммарстрема [378] и Рокаша [379].

Установленными ими высоковероятными источниками МРВ являются лей-козные базофилы крыс (линия RBL-1), клетки мастоцитомы мышей, перитонеальные альвеолярные моноциты и моноциты крови, нейтрофилы, эозинофилы, базофилы крови человека, тучные клетки кишечника крысы, клетки человека, лейкозные базофилы человека и различные сенсибилизированные системы легких [46, 135, 176, 357, 368]. Синтез МРВ может индуцироваться ионофором А 23187, ФМЛФ, ядом кобры, активированным сывороткой зимозаном, иммунными комплексами и агрегированными иммуноглобулинами. У морских свинок высвобождение МРВ под действием антигена наблюдается из фрагментов легких, сенсибилизированных как IgE-, так и IgGj-антителами; у человека же высвобождение МРВ осуществляется главным образом зависимым от IgE способом. Оказалось трудно или невозможно продемонстрировать IgE-зависимое высвобождение МРВ при стимуляции антигеном изолированных перитонеальных тучных клеток крысы [357], несмотря на то, что эти клетки образуют МРВ в ответ на иммунологическую стимуляцию ионофором А 23187 и выделяют гистамин в ответ на антиген. В связи с этим появились предположения и экспериментальные попытки показать, что основным источником МРВ при IgE-зависимых аллергических реакциях в легких служат макрофаги или другие клетки, обладающие рецепторами IgE [380]. С другой стороны, Лихтенштейн [267] недавно показал, что в высокоочищенных тучных клетках легких человека синтезируется достаточно МРВ, чтобы обеспечить ответ в препаратах, полученных из легочного гомогената. Эти исследования, хотя и нуждающиеся в подтверждении, указывают на то, что, возможно, не следует искать другого источника МРВ при аллергических реакциях, кроме тучных клеток.

Значительный интерес представляет поиск фармакологических препаратов, угнетающих 5-липоксигеназу и предотвращающих образование МРВ и других

218_Ч. В. Паркер

продуктов деятельности 5-ЛО. Активность липоксигеназ ингибируется, например, такими антиоксидантами, как нордигидрогуаретовая кислота или витамин Е [362, 363], однако эти агенты не специфичны для 5-ЛО и предотвращают также и образование тромбоксана. Активность 5-ЛО частично подавляется беноксипрофеном — антивоспалительным агентом, применявшимся в ограниченной степени в клинике [381], однако он неспецифичен по отношению к 5-ЛО и во всяком случае оказывает сильное токсическое действие. Наиболее избирательными ингибиторами 5-ЛО являются ацетиленовые аналоги С19—С22 ненасыщенных жирных кислот [381], а также 15-ГПЭТЕ и 15-ГЭТЕ [382, 383]. Эти соединения в определенных условиях могут служить физиологическими ингибиторами фермента, поскольку некоторые клетки, обладающие 5-ЛО, синтезируют также и эти ингибиторы. Данные, полученные в последнее время в нашей лаборатории, свидетельствуют о том, что самым сильным ингибитором 5-ЛО служит 5-ГЭТЕ.

Последовательность событий, ведущих к присоединению SH-групп к образовавшемуся 5-ГЭТЕ и перераспределению двойных связей с образованием МРВ, изучены хуже. Как будет обсуждаться ниже, ЛТС4 (глутатионовая форма МРВ) — основная, а возможно, единственная форма МРВ, продуцирующаяся клетками RBL-1 [383]. При лишении этих клеток восстановленного глутатио-на биосинтез МРВ почти полностью прекращается [384]. Даже снижение концентрации внутриклеточного восстановленного глутатиона на 30—40 % может привести к ослаблению синтеза МРВ. Следовательно, физиологические изменения концентрации глутатиона могут, по-видимому, контролировать синтез МРВ. Поскольку глутатион является основным внутриклеточным донором SH-групп, его значение для образования МРВ очевидно. Является ли присоединение глутатиона ферментативным или неферментативным процессом,— вопрос пока открытый. 5-ГПЭТЕ может прямо реагировать с SH-соединениями с помощью перестроенного промежуточного продукта — 5,6-эпоксида (лейкотриена А), образующегося при реакции гидропероксигруппы с ближайшим углеродом в положении 6 [359]. С другой стороны, более вероятно наличие ферментативного процесса, поскольку ряд клеток, в том числе клетки RBL-1, содержат значительные количества S-глутатионтрансфераз, которые, возможно, и осуществляют эту реакцию. Каков бы ни был механизм переноса SH-групп, вряд ли эта реакция лимитирует скорость биосинтеза МРВ. Если к клеткам RBL-1 прибавить экзогенную 5-ГПЭТЕ, то количество синтезируемого МРВ не будет зависеть от присутствия ионофора А 23187 — наиболее известного стимулятора синтеза МРВ в этих клетках [363, 365]. Это указывает на то, что клеточный механизм присоединения гидропероксида к SH-группе полностью активирован и что основное назначение ионофора — обеспечить образование 5-ГПЭТЭ.

Новосинтезированный ЛТ-С4 быстро выделяется во внеклеточную среду, где превращается в ЛТ-Б4, а в конечном счете в ЛТ-Е4 — под действием ферментов, имеющихся в плазме, самих лейкоцитах и тканях [386—388]. Превращение ЛТ-С4 в ЛТ-04, по-видимому, происходит с участием обычных у-глутамил-трансфераз, а затем, иногда, в присутствии аминопептидаз или карбоксипепти-даз образуется ЛТ-Е4. Оба превращения сопровождаются заметными изменениями биологической активности. Эти процессы были детально исследованы в опытах с гомогенатом легких и на изолированных лейкоцитах, суспендированных в среде, не содержащей ни сыворотки, ни белков плазмы. На таких системах in vitro было показано, что реакция превращения ЛТ-С4 в ЛТ-Б4 происходит в течение 3—5 мин и в первые 15 мин ЛТ-Б4 является основным видом МРВ. Образование ЛТ-Е4 — процесс более медленный, и даже через 30 мин этого соединения в препаратах легких не больше, чем остальных МРВ

27. Медиаторы: высвобождение и функции [386].» В плазме человека такие превращения ЛТ-С4 могут происходить даже при разбавлении плазмы в несколько тысяч раз [388]. МРВ могут подвергаться изомеризации двойных связей или окислению серы, что такжэ приводит к изменению их биологической активности. Судя по результатам исследований, проведенных на мышах и обезьянах, и сами МРВ (особенно ЛТ-Е4), и их метаболиты в значительных количествах выводятся из организма с мочой и желчью [389]. Природа, количество и распределение метаболитов МРВ у человека подлежат дальнейшему исследованию.

Из биологических свойств МРВ наибольшее внимание привлекает их спаз-могенное действие на гладкие мышцы. Сокращение мышц подвздошной кишки или мышц трахеи морской свинки наблюдается при концентрации ЛГГ-Б4 0,1 пмоль/мл [369, 371, 390]. В случае подвздошной кишки ЛТ-Ь4 в 60—100 раз более активен (в пересчете на один моль), чем гистамин, а ЛТ-С4 и ЛТ-Е4 — соответственно в 2 и 10 раз менее активны, чем ЛТ-Б4, но все еще активнее гистамина [357, 387]. Существенно, что МРВ индуцируют устойчивое сокращение гладких мышц, не вызывая тахифилаксии; поэтому продолжительность их действия in vivo может быть велика [366]. Поскольку предполагается, что