Биологический каталог




Структура и функции мембран

Автор В.К.Рыбальченко, М.М.Коганов

еский раствор К.С1. В секциях в и а.2 камеры (рис. 38) участки мышечного препарата через вытекающие из секции растворы соединяются с отводящими неполяризующимися каломельными электродами. Участки мышц в секциях ui и в через поступающие в камеру растворы соединяются с раздражающими Ag — AgCl-электродами. Необходимая температура используемых растворов поддерживается ультратермостатом ТЛ-150. Все растворы в камеру сахарозных промежутков поступают из мариотовских сосудов, что обеспечивает постоянную скорость протекания растворов. Материалы и реактивы: 1. Полоски мышц taenia coli. Морские свинки подвергаются глубокому эфирному наркозу. После вскрытия брюшной полости глазным пинцетом приподнять полоску t. coli, быстро ее отпрепарировать и опустить в стакан с раствором Кребса (г=37°С). 2. Раствор Кребса (в мМ): NaCl—140,7; КС1 — 5,9; NaHC03 — 15,5; NaH2P04—1,2; СаС12 —2,5; MgCl2 —1,2; глюкоза — 11,6. (Глюкозу прибавить перед опытом.) 3. Безнатриевый раствор Кребса (соли Na заменяют изоосмотическим количеством сахарозы). 4. Изотонический раствор сахарозы (309,2 мМ) с удельным сопротивлением не ниже 1 • 105 ОмХ Хсм. 6. Изотонический раствор КС1. 6. ЭГТА (этиленгли-коль-бис-N, N'-тетрауксусная кислота). 7. Строфантин К (лучше оуабаин).

Лабораторная работа М 4.

Исследование изменении трансмембранных электрических процессов неначерченных мышечных клеток taenia coli морской свинки

Ход работы. Полоску t. coli протягивают через горизонтально просверленный канал в секциях камеры сахарозных промежутков и крепят при помощи ниток к стенкам камеры. Сразу же через секции камеры пропускают соответствующие растворы. Проверяют скорость течения растворов, температуру и через 15—20 мин начинают исследование. За это время включают соответствующие приборы, согласно инструкциям, прилагаемым к ним. (Приборы можно включать и до зарядки мышечной полоски в камеру.)

В начале исследования необходимо определить мембранный потенциал покоя (МПП), амплитуду и длительность потенциалов действия (и спонтанную электрическую активность, если таковая наблюдается), величину электротонических потенциалов (ЭТП).

ЭТП регистрируется после подачи на полоску тока разной полярности (попеременно через 1—2 мин) силой 4— 6 мкА. Для определения МПП в тест-секцию пропускают изотонический раствор КС1. Наблюдается сначала быстрая, а затем медленная деполяризация мышечных клеток. Полная деполяризация и соответствует величине МПП, зарегистрированной этим методом. Затем через тест-секцию пропускают раствор Кребса и после установления исходной величины МПП можно проводить исследование влияния ЭГТА (или строфантина К) на МПП, ЭТП, ПД неисчер-ченных мышечных клеток. Для этого к раствору Кребса n-AJ1

Рис. 38. Блок-схема регистрации электрических потенциалов методом сахарозных промежутков:

ем. б\.г, в — описание в тексте; 1 — операционный усилитель; 2 — сопротивление; 3 — усилитель постоянного тока УПТ-2; 4 — осциллограф С1-18; 5 — самопишущий потенциометр К.СП-4: 6 — электронный стимулятор ЭСУ-2

Рис. 39. Мембранный и элек-тротоиические потенциалы не-нсчерченных мышечных клеток:

а — деполяризация и уменьшение потенциала клеток под влиянием бескальциевого раствора (0 Са!+) и последующее восстановление мембранного н электротоиических потенциалов в нормальном растворе Кребса (НРК); б — носле удаления ионов Са2+ из безнатрнево-го раствора

прибавляют 1—0,1 мМ ЭГТА или строфантина К и регистрируют вызванные этими веществами изменения транс-мембраиных электрических потенциалов. (Для большей точности исследований тестирующие растворы Кребса, содержащие строфантин, готовят путем замены NaCl на изо-осмотическое количество данного вещества. В случае исследования влияния ЭГТА, в раствор Кребса СаС12 не прибавляют.)

После регистрации вызванных изменений через тест-секцию пропускают раствор Кребса — «отмывают» полоску. После достижения исходных величин МПП и ЭТП проводят аналогичный эксперимент, но в безнатриевом растворе. Результаты одного из подобных опытов представлены на рис. 39. Фиксируют выявленные отличия и объясняют их с точки зрения современных представлений об ионных механизмах генерации электрических процессов иа плазматической мембране мышечных клеток.

Контрольные вопросы и задания

1. Каков ионный механизм генерации трансмембранных электрических процессов? 2. Объясните роль ионов кальция в изменении ионной проницаемости плазматической мембраны. 3. Каков механизм образованни электротонических потенциалов и причины наблюдаемых в эксперименте изменений? 4. Что такое ионные каналы плазматической мембраны и ионные токи?

3.3. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ МИТОХОНДРИЙ

Для изучения процессов окислительного фосфорилирования и механизмов регуляции клеточного метаболизма широко используются препараты изолированных митохондрий.

Функционально активные митохондрии можно получить только в том случае, если при выделении органелл соблюдаются определенные условия. Так как митохондрии вследствие осмотического шока легко повреждаются в гипотонической или гипертонической среде, при выделении обычно используют 0,3—0,6 М сахарозу или маннит. Кроме компонента, обеспечивающего изотоничность среды выделения, в ее состав вводят фосфатный или трис-буфер рН = 7,0—7,8, а также этилендиаминтетраацетат (ЭДТА), альбумин и другие соединения (аскорбат, цистеин). Добавление ЭДТА способствует рассеиванию примесей, загрязняющих препарат, и связыванию ионов кальция, которые освобождаются при разрушении ткани. Хелатирующее действие ЭДТА свя: зывают с полианионными свойствами его молекулы, содержащей четыре карбоксильных группы. Альбумин адсорбирует образующиеся при выделении митохондрий жирные кислоты, которые обладают разобщающим действием на процессы окислительного фосфорилирования.

Решающее значение для получения качественного препарата изолированных митохондрий имеет способ размельчения ткани. Оно должно проводиться в сравнительно мягких условиях за короткое время. Одним из важнейших факторов помимо среды выделения и способа размельчения

страница 53
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109

Скачать книгу "Структура и функции мембран" (2.22Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]

п»ї
Rambler's Top100 Химический каталог

Copyright © 2009
(12.11.2019)