в исследованных животных тканях. Регуляция ферментативной активности может осуществляться на разных уровнях. Это прежде всего регуляция на уровне субстратов и их аналогов. Вопрос о такого рода регуляции достаточно лолно освещен в литературе. Показано, что Mg-АТФ играет более важную роль в регуляции НАД-киназной активности, чем НАД J41—43], и поэтому именно концентрация АТФ может явиться лимитирующим фактором в синтезе НАДФ в организме. Хорошо известно, что НАД-киназа почти из всех источников ингибируется восстановленными формами пиридиновых нуклеотидов НАДН и НАДФН [44, 19, 45—48] и аналогами АТФ: АДФ [46, 47, 49], АДФР, аденозином, 2'-, 3'- и 5' АМФ [50]. Свободные АТФ4~ и Mg2+ также ингибируют фермент [51]. Предполагают, что инги-биция НАДН и НАДФН может лежать в основе регуляции актив-лости фермента in vivo. Расчеты показали, что при физиологических концентрациях НАДН и НАДФН в печени крысы активность НАД-киназы может быть заторможена на 80 % [43].

158

В обзоре основное внимание было уделено анализу возможных механизмов регуляции ферментативной активности на уровне четвертичной структуры и показана целесообразность и необходимость сравнительного изучения свойств частично очищенного и гомогенного фермента для выявления многообразных способов "регуляции НАД-киназы. Было показано, что фермент в скелетных мышцах кролика, сердце голубя и печени кролика представлен множественными формами и проявляет свойства диссоциирующей ферментной системы. Приведены данные о наличии в ткани печени двух типов фермента (аир), различающихся по субъединичному составу, каталитической активности и целому ряду физико-химических свойств.

В регуляции синтеза НАДФ в животных тканях, опосредованной смещением7 равновесия между олигомерами разной степени ассоциации, проявляющими различную каталитическую активность, определенную роль может играть термостабильный регулятор. Механизм взаимодействия фермента с регулятором не ясен, однако присутствие последнего, по-видимому, способствует сохранению ферментом способности к регуляции активности путем изменения степени олигомеризации.

Очистка фермента до гомогенного состояния сопровождается полным разрушением четвертичной структуры НАД-кииазы из-сердца голубя.. Фермент из печени кролика после фракционирования на ионообменнике сохраняет четвертичную структуру, но получаемые при этом отдельные олигомеры утрачивают способность к взаимным переходам и представляют собой десенсибилизированные формы фермента.

Седиментационный анализ таких олигомеров позволил обнаружить еще один, не описанный ранее в доступной нам литературе способ регуляции ферментативной активности НАД-киназы. Было установлено, что каждый из гомогенных, по данным электрофореза, олигомеров существует в двух формах: активной, которая собственно и осуществляет каталитический акт, и неактивной, доля которой по белку значительно превосходит долю активно работающей формы. В присутствии субстратов происходит частичный переход из неактивной формы в активную, количество которой зависит как от типа (а или р), так и от молекулярного веса олигомеров.

По-видимому, указанные способы регуляции ферментативной активности НАД-киназы могут реализоваться в клетке in vivo.

ЛИТЕРАТУРА

1. Ньюсхолм Э., Старт К. (1977) Регуляция метаболизма. Мир, М.

2. Телепнева В. И., Инсарова И. Д. (1974) Докл. АН СССР, 218, 234—237.

3. Иисарова И. Д., Лебедев А. Н., Телепнева В. И. (1974). Докл.. АН СССР 219, 488—491.

4. Иисарова И. Д., Телепнева В. И. (1977) Укр. биохим. жури. 49, 124—129.

5. Булыгина Е. Р., Телепнева В. И. (1980) Биохимия 45, 2019—2027.

6. Нгуен Ван Тхиет, Телепнева В. И. (1981) Биохимия 46, 435—443.

15»

t

7. Bulygina E. R., Telepneva V. I. (1982) Biochem. Intern. 4, 135—142. •8. Agostn M., Ilivicky J., Litvak S. (1967) Canad. J. Biochem. 45, 619—626.

9. Muto S., Miy a chi S. (1977) Plant. Physiol. 59, 55—60.

10. Butler J. R., McGuinnes E. T. (1982) Int. J. Biochem. 14, 839—844.

11. Apps D. K. (1970) Europ. J. Biochem. 13, 223—230.

12. Афанасьева Т. П., Филиппович С. Ю., Крицкин М. С. (1982) Прикладная биохимия н микробиология 18, 376—382.

13. Murata К-, U chi da Т., Tani К- et al. (1980) Agric. Biol. Chem. 44,. 61—68.

14. ЖучихинаА. А., ЭтингофР. H. (1973) Докл. АН СССР, 212, 996—999. 45. Chung A. E. (1968) BBA 159, 490—495.

16. Kopperschlager G., Diezel W., Bierwagen В., Hofmann E. (1969) FEBS Lett. 5, 221—224.

17. Nguyen Van Thiet, Telepneva V. I. (1982) Biochem. Intern., 4, 409—416.

18. Немчннская В. Л., Божков В. М., Кушнер В. П. (1970) Биохимия 35, 1067—1072.

19. Apps D. К. (1975) Europ. J. Biochem. 55, 475—483.

20. Tseng Y.-M., Harris B. G., Jacob son M. K. (1979) BBA, 568, 205—214.

21. Курганов Б. И. (1978) Аллостерическне ферменты, Наука, М.

122. Беляева Н. Ф., Телепнева В. И. (1973) Докл. АН СССР, 209, 977—979.

23. Беляева Н. Ф., Телепнева В. И. (1974) Биохимия 39, 975—983. - 24. Булыгина Е. Р., Телепнева В. И. (1983) Бнохнмия, 48, 906—913. 25". Инсарова И. Д., Беляева Н. Ф., Телепнева В. И. (1976) Бюлл. экспер. биол. н мед., 82, 957—959.

26. Ш н о л ь С. Э., К о л о м б е т В. А., Иванова Н. П., Б р н ц к а я Г. Я. (1980) Биофизика, 25, 409—416.

27. Четв е р ико в а Е. П. (1972) в кн. Механизмы мышечного сокращения, с. 26—32, Наука, М.

28. MeijerL., GuerrierP. (1982) BBA, 702, 143—146.

"29. Anderson J. M., Cormier M. J. (1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 84, 595—602.

30. Anderson J. M., С h a r b о п п e a u H.Jones H. P. et al. (1970) Biochemistry 19, 3113—3120.

31. Gupta S. K., Rothstein M. (1976) Biochem. Biophys. Res. Commun. 69, , 48—54.

32. Cohen R., Mire M. (1971) Europ. J. Biochem. 23, 267—281.

33. Hester berg L. K., Lee J. C. (1980) Biochemistry 19, 2030—2039. I

34. Hesterberg L. K., Lee J. G., Erickson H. P. (1981) JBC, 256, ¦9724—9730.

35. Ireland C. R., Wolfe R. G. (1979) BBA, 566, 397—399.

36. Karadsheh N. S., Uyeda K. (1977) JBC. 252, 3515—3524.

37. Taylor B. L., Bar den R. E., Utter M. F. (1972) JBC, 247, 7383—7390.

38. Taylor B. L., Frey W. H., Barden R. E. et al. (1978) JBC, 253, 3062— 3069.

39. Spec tor T. (1978) Anal. Biochem., 86, 142—146.

40. Hesterberg L. K.. Lee J. C. (1982) Biochemistry 21, 216—222.

41. Slater T. F. (1966) Biochem. J. 99, p. 2P.

42. Green b a urn A. L., Clark J. В., McLean P. (1964) 93, 17—19.

43. Oka H., Field J. B. (1968) JBC, 243, 815—819.

44. Немчииская В. Л., Смирнова Т. Б. (1967) Бнохнмия 32, 854—858.

45. Blomquist Ch. Н. (1973) JBC, 248, 7044—7048.

46. Северян С. Е., Телепнева В. И., Цейтлнн Л. А. (1970) Биохимия 35, 329—335.

47. Телепнева В. И., Мештер Р. (1971) Вопр. мед. химии 17, 20—26.

48. YamamotoY. (1966) Plant Physiol. 41, 523—528.

49. Apps D. К. (1968) Europ. J. Biochem. 5. 444—450.

50. Wang T. P., Kaplan N. O. (1954) JBC, 206, 311—325.

51. Apps D. K- (1969) Europ. J. Biochem. 7, 260—266.

160

ИССЛЕДОВАНИЕ КИНЕТИКИ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИЙ ПОД ВЫСОКИМ ДАВЛЕНИЕМ

В. Я. Черняк

(Межфакультетская п